Exame da cromatina das células do líquido amniótico

Para famílias com histórico familiar de doenças hereditárias recessivas ligadas ao cromossomo X, o fenótipo parental é normal, se a mãe é portadora do gene causador da doença, a probabilidade do filho ser 50%, a filha tem um fenótipo normal, mas metade dele. Pode ser um portador. Quando o pai é um paciente, os filhos são normais e as filhas são todas portadoras de exame de cromatina de células amnióticas para prever o sexo do feto para estimar a probabilidade de ocorrência de certas doenças hereditárias. Informação básica Especialista Categoria: Maternal Examination Check Categoria: Testes Genéticos (DNA) Sexo aplicável: se as mulheres estão em jejum: não jejuar Resultados da análise: Abaixo do normal: Valor normal: Não Acima do normal: Negativo: X cromatina:> 0,06 para o feto feminino e 0,05 para o feto masculino. Positivo: A probabilidade de doença recessiva recessiva ligada ao cromossomo X é determinada com base nos resultados. Dicas: A amniocentese geralmente é realizada no segundo trimestre (16 a 21 semanas de gestação). Valor normal X cromatina> 0,06 para fetos femininos, <0,05 para fetos masculinos; A cromatina Y> 0,05 é um feto masculino e <0,04 é um feto feminino. Significado clínico Para famílias com histórico familiar de doenças hereditárias recessivas ligadas ao cromossomo X, o fenótipo parental é normal, se a mãe é portadora do gene causador da doença, a probabilidade do filho ser 50%, a filha tem um fenótipo normal, mas metade dele. Pode ser um portador. Quando o pai é um paciente, o filho é normal, e a filha é portadora, como hemofilia A, hemofilia B, deficiência de glicose-6-fosfato desidrogenase, cegueira vermelho-verde, distrofia muscular pseudo-hipertrófica. Deficiência de gamaglobulina congênita. Resultados positivos podem ser doenças: hemofilia, hiperamonemia congênita em crianças, daltonismo A amniocentese geralmente é realizada no segundo trimestre (16 a 21 semanas de gestação). A urina deve ser drenada antes da cirurgia, com ambas as mãos nos quadris e gentilmente virar a cintura e o abdômen. Em seguida, em posição supina, use o ultra-som B para detectar o posicionamento, selecionar o ponto de punção e perfurar sob condições estritas de operação asséptica. Geralmente, cerca de 20 ml de líquido amniótico são retirados e colocados em um tubo de centrífuga limpo e esterilizado para inspeção imediata. Processo de inspeção (1) Tome 15 a 30 ml de líquido amniótico por 16 a 20 semanas de gestação e centrifugue a 1000 r / ml por 10 min. (2) Descartar o sobrenadante em excesso, deixar 1 ml de líquido amniótico e células precipitadas, e dispersar suavemente em uma suspensão de células. (3) Transferir para um balão de cultura de 25 ml, juntar 3 ml de um meio com pH entre 6,5 e 6,8 (contendo penicilina 100 U / ml, estreptomicina 100 μg / ml) e 1 ml de soro de vitelo e incubar a 37 ° C. (4) Um grande número de colônias de células semelhantes a fibroblastos ou epitelióides foi observado após 7-10 dias de cultura. O meio fresco pode ser trocado neste momento. (5) Quando as colônias celulares são expandidas em pedaços e há muitas células divisórias circulares translúcidas, colchicina pode ser adicionada para fazer a concentração final 0.1-0.3 μg / ml, e então cultivada em uma incubadora a 37 ° C por 5-6 h. (Os procedimentos acima são todos realizados sob condições assépticas). Padrões de colheita: 1 com fibroblastos como o principal tipo, o crescimento das células, 2 com 10x oculares e 20x observação objetiva, os clones de células em crescimento cobrem 1 ou mais campos completos de visão, 3 ver mais de 10 translúcidos Células redondas e mais de 10 células divisórias brilhantes redondas duplas. (6) Se as células não estão crescendo vigorosamente, o ciclo de crescimento não é uniforme ou as células estão envelhecendo, e o padrão de colheita não é alcançado, a subcultura pode ser continuada no frasco original. Método: Sob condições estéreis, a solução de cultura foi primeiro vertida e adicionaram-se algumas gotas de solução de tripsina estéril 2,5 g / L, e a mistura foi agitada e vertida. Além disso, 5 a 10 gotas de tripsina foram adicionadas e agitadas suavemente a 37 ° C durante cerca de 5 minutos para provocar a queda das células aderentes. Foram adicionados 4 ml de meio fresco contendo soro de vitelo e a cultura foi deixada em repouso a 37 durante 4 a 5 horas. Mude cuidadosamente o meio de cultura e continue a cultura, que pode ser colhida 3 a 5 dias após a passagem. (7) Transferir a solução de cultura para um tubo centrífugo graduado, adicionar 1 ml de solução de ED-TA-tripsina ao frasco, colocar em incubadora a 37 ° C por 5 min, e depois enxaguar as células aderentes com uma pipeta de cotovelo (2,5 g / também pode ser usado) L digestão da solução de tripsina). As culas separadas da parede da garrafa foram vertidas num tubo de centrifugao, misturadas com a fase luida da cultura original e o bal de cultura foi lavado com uma pequena quantidade de soluo salina fisiolica morna e as culas lavadas foram tamb vertidas para o tubo de centrifugao e centrifugadas a 1000 rpm durante 10 min. (8) Aspirar o sobrenadante, adicionar 3 a 5 ml de solução hipotônica KCl 0,075 mol / L pré-aquecido a 37 ° C e ajustar a 37 ° C por 10 a 15 min. (9) A pré-fixação, a fixação e a preparação são as mesmas do método de preparação das amostras de cromossomas das células do sangue periférico. Não é adequado para a multidão Pessoas tabu: 1. Houve sinais de aborto durante a gravidez. 2. Quando a temperatura do corpo excede 37,5 ° C. 3. Esfoliação precoce da placenta, infecção abdominal e purulenta. Reações adversas e riscos (1) lesão materna: punção punção agulha vasos sanguíneos ferida causada por hematoma da parede abdominal hematoma subseroso uterino. Ocasionalmente, o líquido amniótico entra na circulação sanguínea materna do orifício da punção e causa embolia do líquido amniótico. A bexiga não foi esvaziada antes da punção e a bexiga foi lesada. (2) Lesão do feto, placenta e cordão umbilical: A agulha de punção pode danificar o feto e causar sangramento, e a placenta e o cordão umbilical também podem causar sangramento ou hematoma. Portanto, a fonte de sangramento deve ser identificada quando se toma líquido amniótico hemorrágico. Se você suspeitar que é de um feto, continue a ouvir o coração fetal. (3) Vazamento de líquido amniótico: líquido amniótico pós-operatório vaza do orifício, causando muito pouco líquido amniótico, afetando o desenvolvimento fetal e até causando aborto espontâneo ou parto prematuro. (4) aborto ou parto prematuro: a incidência de aborto ou parto prematuro é de 0,1% -0,2%, muitas vezes ocorre dentro de uma semana após a cirurgia, mesmo após a punção, ruptura prematura de membranas leva ao parto prematuro. (5) infecção intra-uterina: pode haver febre materna após a cirurgia. Infecção intra-uterina pode causar desenvolvimento fetal anormal, ou até mesmo a morte fetal. Portanto, a amniocentese deve ser estritamente asséptica.

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