elektroforeza hemoglobiny

Różne punkty izoelektryczne różnych hemoglobin mają różne ładunki dodatnie i ujemne w pewnym buforze pH, a hemoglobina porusza się w różnych kierunkach po elektroforezie. Podstawowe informacje Klasyfikacja specjalistyczna: klasyfikacja badań wzrostu i rozwoju: badanie krwi Obowiązująca płeć: czy mężczyźni i kobiety stosują post: post Wskazówki: Przed badaniem dieta jest lekka, a alkohol jest zabroniony. Wartość normalna Metodą elektroforezy był HbA 95%, HbA 21,1% do 3,2%, a HbA 32% do 3%. Metoda Singera ma HbF <4%. Znaczenie kliniczne 1, głównym składnikiem jest HbS i brak HbB, można zaobserwować w sierpowatokrwinkowej chorobie hemoglobinowej. 2, HbS, HbF i HbA2 nieznacznie wzrosły, podczas gdy HbA rzadko lub zniknęło, w połączeniu z badaniem można zdiagnozować niedokrwistość morską HbS-β, częściej występującą w basenie Morza Śródziemnego. 3, oprócz HbS, zawierającego 10% -30% HbA i nieznacznie podwyższonego HbF i HbA2, można również rozważyć niedokrwistość morską HbS-β. 4. HbS stanowi 20% -30%, HbA stanowi 65% -75% i zawiera normalne HbF i HbA2, które można zdiagnozować jako niedokrwistość HbS-α-morska. 5, HbA znika, HbC stanowi 28% -44% całkowitej hemoglobiny, może być zdiagnozowane jako choroba hemoglobinowa, częściej u czarnych, więcej komórek docelowych można zobaczyć we krwi. 6, występuje HbS, pojawia się również HbD, są komórki docelowe w filmie krwi, można zdiagnozować jako choroba hemoglobiny D, bardziej powszechna w północnych Chinach. 7, HbE powoduje elektroforezę, można ją zdiagnozować jako chorobę hemoglobiny E, występującą głównie w Azji Południowo-Wschodniej, Indiach itp., Chiny są bardziej powszechne w południowym Guangdong. Środki ostrożności Elektroforeza w membranie z kwasem woskowym metodą bezpośredniej kolorymetrii Odczynnik: Elektroforeza z mikrohemoglobiną membrany z octanu celulozy. Operacja: (1) Membranę z octanu celulozy pocięto na 1/3 (4 cm x 8 cm) w buforze TEB na 10 minut lub dłużej. (2) Usuń folię z octanu celulozy i użyj bibuły filtracyjnej, aby usunąć nadmiar wody. 10 μl rozpuszczonej krwi 100 g / l pochłonięto za pomocą pipety Hb i równomiernie nałożono na dolną krawędź szklanego popychacza i umieszczono na matowej stronie w odległości 1,5 do 2,0 cm od końca katody folii. Wykonaj dwie kopie każdego okazu jednocześnie. (3) Elektroforeza: Bufor poddaje się elektroforezie ze śladową ilością hemoglobiny. Napięcie wynosi 180 V, a czas wynosi 40 min ~ 1 godz. (Komórki są wyraźnie oddzielone w każdej strefie.) Po elektroforezie elektrody są wymieniane, a bufor może być używany wielokrotnie. (4) Elucja i oznaczanie ilościowe HbA, HbA2 i strefa kontrolna odpowiadająca wielkości HbA2 zostały oddzielnie odcięte. Jeśli nienormalne strefy Hb (HbX) są również cięte w tym samym czasie, są one umieszczane w odpowiednich rurkach. Dodaj 10 ml buforu TEB do probówki HbA, dodaj 2 ml buforu TEB do każdej probówki, moczyć przez 30 minut, ciągle wstrząsając. Po całkowitym wymyciu. Eluat zmieszano i spektrofotometr 721 o długości fali 413 nm. Ślepa próba jest zerowana i mierzona jest absorbancja każdej probówki. Proces kontroli (1) Elektroforeza śladowej hemoglobiny: 1 folia zanurzeniowa: folia z octanu celulozy unosi się na powierzchni buforu TEB i może być używana przez co najmniej 20 minut po równomiernym namoczeniu i zatopieniu. Zapobiega to tworzeniu pęcherzyków. 2 kropki: Usuń folię z octanu celulozy i użyj bibuły filtracyjnej, aby usunąć nadmiar wody. Roztwór hemoglobiny odsysano w mikropipecie i umieszczano we wklęsłym rowku aplikatora z wieloma próbkami, roztwór hemoglobiny pobierano pipetą z wieloma próbkami i nakrapywano na matowej stronie folii z octanu celulozy. 1,5 do 2 cm od końca katody, plamienie wynosi około 3 do 5 μl, a normalny roztwór hemoglobiny w pozycji równoległej służy jako kontrola. 3 Elektroforeza: Dodaj równą ilość roztworu buforowego BB w zbiorniku buforowym po obu stronach zbiornika mikroelektroforezy i użyj dwuwarstwowej bibuły filtracyjnej jako mostka solnego na nośniku membrany z octanu celulozy. Film był matowy do dołu, a elektroda ujemna została zakończona plamką i zrównoważona przez 5 minut. Włącz zasilanie. Napięcie wynosi 180 V, prąd wynosi około 0,2 mA / cm, a czas elektroforezy wynosi 20-30 minut. Bufor w zbiorniku może być ponownie użyty po przełączeniu elektrod. 4 Barwienie: Elektroforezowaną folię wyjęto w czerwonym roztworze barwiącym Ponceau na około 10 minut i przepłukano 3% kwasem octowym kilka razy, aż tło stało się białe i wysuszone. 5 Przezroczysty: Folia z octanu celulozy jest namoczona w przezroczystej cieczy, przyklejona do czystej szklanej płytki, a bąbelki między nimi są usuwane przez szklany pręt. Niewielką ilość lodowatego kwasu octowego wlano do cylindra chromatograficznego, a szklaną płytkę odwrócono na cylindrze chromatograficznym (folią skierowaną do wewnątrz). Dymić lotnym lodowatym kwasem octowym przez 10–20 minut i usunąć folię, gdy będzie przezroczysta. (2) Kolorymetryczna barwienie metodą elektroforezy w membranie z octanu celulozy 1 Usuń membranę z octanu celulozy o wymiarach 4 cm × 6 cm nasączoną buforem TEB i osusz nadmiar wody bibułą filtracyjną. W odległości 1,5 cm od końca katody matowej powierzchni około 5 μl 50 g / l roztworu Hb zostało liniowo i równomiernie upakowane pipetą hemoglobiny Po przeniknięciu roztworu hemoglobiny do membrany membranę odwrócono na bibułę mostkową na płycie nośnej zbiornika do elektroforezy. 2 Elektroforeza: napięcie 180 V, czas 30 ~ 40 min, z zastrzeżeniem całkowitego oddzielenia stref Hb. Elektrodę wymienia się po elektroforezie, a bufor do elektroforezy można stosować wiele razy. 3 Barwienie: Film zanurza się w roztworze farbującym, który musi być farbowany przez 2 godziny zimą i 25 ~ 30 ° C latem, może być farbowany tylko przez około 30 minut. Należy pamiętać, że jeśli barwienie nie jest przezroczyste (np. Czas jest zbyt krótki lub roztwór hemoglobiny jest zbyt skoncentrowany) lub napięcie jest zbyt wysokie, pasmo HbA jest zbyt skoncentrowane, a wstęga jest łatwo odrywana, co wpływa na dokładność pomiaru ilościowego. Myj kilkakrotnie roztworem wybielającym, aż tło zostanie spłukane. 4 Ocena ilościowa: Płukaną membranę wyjęto i każdą strefę przecięto, a strefę kontrolną odpowiadającą wielkości HbA2 umieszczono w każdej odpowiedniej probówce. 10 ml odcieku dodano do probówki HbA, a pozostałe probówki zanurzono w 2 ml, moczono przez 20 minut i od czasu do czasu wytrząsano. Spraw, aby wstążka była całkowicie eluowana (zwróć uwagę, że w wyższych temperaturach czas elucji nie powinien być zbyt długi, w przeciwnym razie eluent niebieski zmniejszy się i stopniowo zmieni kolor na fioletowy). Eluat zmieszano, a absorbancję każdej probówki zmierzono za pomocą spektrofotometru 721 przy długości fali 620 nm i wyzerowano za pomocą ślepej próby. 5 obliczenia: ta sama bezpośrednia kolorymetria. Elektroforeza w membranie z kwasem woskowym metodą bezpośredniej kolorymetrii Odczynnik: Elektroforeza z mikrohemoglobiną membrany z octanu celulozy. Operacja: (1) Membranę z octanu celulozy pocięto na 1/3 (4 cm x 8 cm) w buforze TEB na 10 minut lub dłużej. (2) Usuń folię z octanu celulozy i użyj bibuły filtracyjnej, aby usunąć nadmiar wody. 10 μl rozpuszczonej krwi 100 g / l pochłonięto za pomocą pipety Hb i równomiernie nałożono na dolną krawędź szklanego popychacza i umieszczono na matowej stronie w odległości 1,5 do 2,0 cm od końca katody folii. Wykonaj dwie kopie każdego okazu jednocześnie. (3) Elektroforeza: elektroforeza buforu i mikro hemoglobiny. Napięcie wynosi 180 V, a czas wynosi 40 min ~ 1 godz. (Komórki są wyraźnie oddzielone w każdej strefie.) Po elektroforezie elektrody są wymieniane, a bufor może być używany wielokrotnie. (4) Elucja i oznaczanie ilościowe HbA, HbA2 i strefa kontrolna odpowiadająca wielkości HbA2 zostały oddzielnie odcięte. Jeśli nienormalne strefy Hb (HbX) są również cięte w tym samym czasie, są one umieszczane w odpowiednich rurkach. Dodaj 10 ml buforu TEB do probówki HbA, dodaj 2 ml buforu TEB do każdej probówki, moczyć przez 30 min, ciągle wstrząsać. Po całkowitym wymyciu. Eluat zmieszano i spektrofotometr 721 o długości fali 413 nm. Ślepa próba jest zerowana i mierzona jest absorbancja każdej probówki. Nie nadaje się dla tłumu Bez tabu. Działania niepożądane i ryzyko Ryzyko zakażenia: W przypadku użycia nieczystej igły może istnieć ryzyko zakażenia.

Materiały na tej stronie mają na celu ogólne wykorzystanie informacyjne i nie stanowią porady medycznej, prawdopodobnej diagnozy ani zalecanych metod leczenia.