Hämoglobinelektrophorese

Verschiedene isoelektrische Punkte von verschiedenen Hämoglobinen weisen in einem bestimmten pH-Puffer unterschiedliche positive und negative Ladungen auf, und das Hämoglobin bewegt sich nach der Elektrophorese in verschiedene Richtungen. Grundlegende Informationen Fachklassifikation: Wachstums- und Entwicklungsuntersuchung Klassifikation: Blutuntersuchung Anwendbares Geschlecht: ob Männer und Frauen Fasten anwenden: Fasten Tipps: Vor der Untersuchung ist die Diät leicht und Alkohol verboten. Normalwert Das Elektrophoreseverfahren war HbA 95%, HbA 21,1% bis 3,2% und HbA 32% bis 3%. Die Singer-Methode hat einen HbF <4%. Klinische Bedeutung 1, die Hauptkomponente ist HbS, und kein HbB kann bei Sichelzellen-Hämoglobin-Krankheit gesehen werden. 2, HbS, HbF und HbA2 leicht erhöht, während HbA selten oder verschwunden, kombiniert mit der Untersuchung als HbS-β-marine Anämie, häufiger im Mittelmeerraum diagnostiziert werden kann. In 3 kann zusätzlich zu HbS, das 10% -30% HbA und leicht erhöhtes HbF und HbA2 enthält, auch HbS-β-marine Anämie in Betracht gezogen werden. 4. HbS macht 20% -30% aus, HbA 65% -75% und enthält normalen HbF und HbA2, die als HbS-α-marine Anämie diagnostiziert werden können. 5, HbA verschwindet, HbC macht 28% -44% des gesamten Hämoglobins aus, kann als Hämoglobin-Krankheit diagnostiziert werden, häufiger bei schwarzen Menschen, mehr Zielzellen können im Blut gesehen werden. 6, gibt es HbS, HbD erscheint auch, gibt es Zielzellen im Blutfilm, kann als Hämoglobin-D-Krankheit diagnostiziert werden, häufiger in Nordchina. 7, HbE Ergebnisse in der Elektrophorese, kann als Hämoglobin E-Krankheit diagnostiziert werden, vor allem in Südostasien, Indien, etc. gefunden, China ist häufiger in Süd-Guangdong. Vorsichtsmaßnahmen Direkte Kolorimetrie durch Wachs-Säurefaser-Membranelektrophorese Reagenz: Elektrophorese mit Mikrohämoglobin der Celluloseacetatmembran. Bedienung: (1) Die Celluloseacetatmembran wurde in TEB-Puffer für 10 Minuten oder länger in 1/3 (4 cm × 8 cm) geschnitten. (2) Entfernen Sie den Celluloseacetatfilm und entfernen Sie überschüssiges Wasser mit einem Filterpapier. 10 ul 100 g / l gelöstes Blut wurden mit einer Hb-Pipette absorbiert und gleichmäßig auf den unteren Rand des Glasschiebers aufgetragen und in einem Abstand von 1,5 bis 2,0 cm vom Kathodenende der Folie auf die matte Seite gelegt. Machen Sie zwei Kopien von jedem Exemplar gleichzeitig. (3) Elektrophorese: Der Puffer wird mit einer Spurenmenge Hämoglobin einer Elektrophorese unterzogen. Die Spannung beträgt 180V und die Zeit beträgt 40min ~ 1h. (Die Zellen sind in jeder Zone deutlich voneinander getrennt.) Nach der Elektrophorese werden die Elektroden ausgetauscht, und der Puffer kann wiederholt verwendet werden. (4) Elution und Quantifizierung HbA, HbA2 und eine Kontrollzone, die der Größe von HbA2 entsprach, wurden getrennt geschnitten. Wenn auch abnormale Hb-Zonen (HbX) gleichzeitig geschnitten werden, werden sie in die entsprechenden Röhren gegeben. 10 ml TEB-Puffer in das HbA-Röhrchen geben, 2 ml TEB-Puffer in jedes Röhrchen geben, 30 Minuten einweichen, ständig schütteln. Nach dem vollständigen Eluieren. Das Eluat wurde mit einem 721-Spektrophotometer mit einer Wellenlänge von 413 nm gemischt. Der Blindwert wird auf Null gesetzt und die Extinktion jedes Röhrchens gemessen. Inspektionsprozess (1) Elektrophorese von Spuren von Hämoglobin: 1 Tauchfilm: Der Celluloseacetatfilm wird auf der Oberfläche des TEB-Puffers aufgeschwemmt und kann mindestens 20 Minuten lang verwendet werden, nachdem er gleichmäßig eingeweicht und eingetaucht wurde. Dies verhindert, dass Blasen erzeugt werden. 2 Punkt: Entfernen Sie den Celluloseacetatfilm und entfernen Sie überschüssiges Wasser mit Filterpapier. Die Hämoglobinlösung wurde in einer Mikropipette abgesaugt und in eine konkave Nut eines Mehrprobenapplikators gegeben.Die Hämoglobinlösung wurde mit einer Mehrprobenpipette entnommen und auf eine matte Seite des Celluloseacetatfilms getupft. 1,5 bis 2 cm vom Kathodenende entfernt beträgt die Menge an Flecken etwa 3 bis 5 & mgr; l, und die normale Hämoglobinlösung an der Parallelposition wird als Kontrolle verwendet. 3 Elektrophorese: Geben Sie eine gleiche Menge BB-Pufferlösung in den Puffertank auf beiden Seiten des Mikroelektrophoresetanks und verwenden Sie ein zweilagiges Filterpapier als Salzbrücke auf dem Celluloseacetatmembranträger. Der Film war am Boden matt, und die negative Elektrode wurde mit einem Fleck abgeschlossen und 5 Minuten lang äquilibriert. Schalten Sie den Strom ein. Die Spannung beträgt 180 V, die Strommenge beträgt etwa 0,2 mA / cm und die Elektrophoresezeit beträgt 20-30 min. Der Puffer im Tank kann nach dem Umschalten der Elektroden wieder verwendet werden. 4 Färbung: Der elektrophoretische Film wurde etwa 10 Minuten in der Ponceau-Rot-Färbelösung herausgenommen und mehrmals mit 3% iger Essigsäure gespült, bis der Hintergrund weiß und getrocknet war. 5 Transparent: Der Celluloseacetatfilm wird in eine transparente Flüssigkeit getaucht, auf eine saubere Glasplatte geklebt und die Blasen zwischen den beiden werden mit einem Glasstab entfernt. Eine kleine Menge Eisessig wurde in einen Chromatographiezylinder gegossen, und die Glasplatte wurde umgekehrt auf den Chromatographiezylinder gelegt (wobei der Film nach innen gerichtet war). 10 bis 20 Minuten mit flüchtigem Eisessig rauchen und den Film entfernen, wenn er transparent ist. (2) Zelluloseacetatmembran-Elektrophorese-Färbeverfahren: 1 Entfernen Sie die in TEB-Puffer getränkte 4 cm × 6 cm große Celluloseacetatmembran und tupfen Sie überschüssiges Wasser mit Filterpapier ab. In einem Abstand von 1,5 cm vom Kathodenende der matten Oberfläche wurden etwa 5 & mgr; l einer 50 g / l Hb-Lösung linear und gleichmäßig mit einer Hämoglobinpipette gepackt Nach dem Eindringen der Hämoglobinlösung in die Membran wurde die Membran auf eine Filterpapierbrücke der Elektrophoresetank-Trägerplatte umgedreht. 2 Elektrophorese: Spannung 180 V, Zeit 30 ~ 40 min, vorbehaltlich einer vollständigen Trennung der Hb-Zonen. Die Elektrode wird nach der Elektrophorese ausgetauscht und der Elektrophoresepuffer kann mehrmals verwendet werden. 3 Färben: Der Film wird in die Färbelösung getaucht und muss im Winter 2 Stunden und im Sommer 25 bis 30 ° C gefärbt werden. Beachten Sie, dass wenn die Färbung nicht transparent ist (z. B. wenn die Zeit zu kurz ist oder die Hämoglobinlösung zu konzentriert ist) oder wenn die Spannung zu hoch ist, die HbA-Bande zu konzentriert ist und sich das Band leicht ablöst, was die Genauigkeit der Quantifizierung beeinträchtigt. Waschen Sie mehrmals mit Bleichlösung, bis der Hintergrund abgespült ist. 4 Quantifizierung: Die gespülte Membran wurde herausgenommen und jede Zone wurde geschnitten, und eine Kontrollzone, die der Größe von HbA2 entsprach, wurde in jedes entsprechende Reagenzglas gegeben. 10 ml des Sickerwassers wurden in das HbA-Röhrchen gegeben, und die verbleibenden Röhrchen wurden in 2 ml eingetaucht, 20 Minuten eingeweicht und von Zeit zu Zeit geschüttelt. Machen Sie das Band vollständig eluiert (beachten Sie, dass bei höheren Temperaturen die Elutionszeit nicht zu lang sein sollte, da sonst das Elutionsblau abnimmt und allmählich lila wird). Das Eluat wurde gemischt und die Extinktion jedes Röhrchens wurde unter Verwendung eines 721-Spektrophotometers bei einer Wellenlänge von 620 nm gemessen und mit einer Blindprobe auf Null gesetzt. 5 Berechnung: die gleiche direkte Farbmetrik. Direkte Kolorimetrie durch Wachs-Säurefaser-Membranelektrophorese Reagenz: Elektrophorese mit Mikrohämoglobin der Celluloseacetatmembran. Bedienung: (1) Die Celluloseacetatmembran wurde in TEB-Puffer für 10 Minuten oder länger in 1/3 (4 cm × 8 cm) geschnitten. (2) Entfernen Sie den Celluloseacetatfilm und entfernen Sie überschüssiges Wasser mit einem Filterpapier. 10 ul 100 g / l gelöstes Blut wurden mit einer Hb-Pipette absorbiert und gleichmäßig auf den unteren Rand des Glasschiebers aufgetragen und in einem Abstand von 1,5 bis 2,0 cm vom Kathodenende der Folie auf die matte Seite gelegt. Machen Sie zwei Kopien von jedem Exemplar gleichzeitig. (3) Elektrophorese: Elektrophorese von Puffer und Mikrohämoglobin. Die Spannung beträgt 180V und die Zeit beträgt 40min ~ 1h. (Die Zellen sind in jeder Zone deutlich voneinander getrennt.) Nach der Elektrophorese werden die Elektroden ausgetauscht, und der Puffer kann wiederholt verwendet werden. (4) Elution und Quantifizierung HbA, HbA2 und eine Kontrollzone, die der Größe von HbA2 entsprach, wurden getrennt geschnitten. Wenn auch abnormale Hb-Zonen (HbX) gleichzeitig geschnitten werden, werden sie in die entsprechenden Röhren gegeben. 10 ml TEB-Puffer in das HbA-Röhrchen geben, 2 ml TEB-Puffer in jedes Röhrchen geben, 30 Minuten einweichen, ständig schütteln. Nach dem vollständigen Eluieren. Das Eluat wurde mit einem 721-Spektrophotometer mit einer Wellenlänge von 413 nm gemischt. Der Blindwert wird auf Null gesetzt und die Extinktion jedes Röhrchens gemessen. Nicht für die Menge geeignet Keine Tabus. Nebenwirkungen und Risiken Infektionsrisiko: Wenn Sie eine unsaubere Nadel verwenden, besteht Infektionsrisiko.

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