Badanie chromatyny płynu owodniowego

W przypadku rodzin z rodzinną historią recesywnych chorób dziedzicznych sprzężonych z chromosomem X fenotyp rodzicielski jest prawidłowy. Jeśli matka jest nosicielką genu wywołującego chorobę, prawdopodobieństwo syna dziecka wynosi 50%; córka ma normalny fenotyp, ale połowa z nich. Może być przewoźnikiem. Kiedy ojciec jest pacjentem, wszyscy synowie są normalni, a wszystkie córki są nosicielkami badania chromatyny komórek owodniowych w celu przewidzenia płci płodu w celu oszacowania prawdopodobieństwa wystąpienia niektórych chorób dziedzicznych. Podstawowe informacje Kategoria specjalistyczna: Kontrola matek Sprawdź Kategoria: Testy genetyczne (DNA) Obowiązująca płeć: czy kobiety poszczą: nie poszczą Wyniki analizy: Poniżej normy: Wartość normalna: Nie Powyżej normalnego: Negatywne: Chromatyna X:> 0,06 dla płodu żeńskiego i 0,05 dla płodu męskiego. Pozytywne: Prawdopodobieństwo recesywnej choroby sprzężonej z chromosomem X określa się na podstawie wyników. Wskazówki: Amniopunkcję wykonuje się zwykle w drugim trymestrze ciąży (16–21 tygodni ciąży). Wartość normalna Chromatyna X> 0,06 dla płodów żeńskich, <0,05 dla płodów męskich; Chromatyna Y> 0,05 to płód męski, a <0,04 to płód żeński. Znaczenie kliniczne W przypadku rodzin z rodzinną historią recesywnych chorób dziedzicznych sprzężonych z chromosomem X fenotyp rodzicielski jest prawidłowy. Jeśli matka jest nosicielką genu wywołującego chorobę, prawdopodobieństwo syna dziecka wynosi 50%; córka ma normalny fenotyp, ale połowa z nich. Może być przewoźnikiem. Kiedy ojciec jest pacjentem, syn jest w normie, a córka jest nosicielką, taką jak hemofilia A, hemofilia B, niedobór dehydrogenazy glukozo-6-fosforanu, czerwono-zielona ślepota, dystrofia mięśniowa rzekomo-przerostowa Wrodzony niedobór globuliny gamma. Pozytywnymi wynikami mogą być choroby: hemofilia, wrodzona hiperamonemia u dzieci, ślepota barw Amniopunkcję wykonuje się zwykle w drugim trymestrze ciąży (16–21 tygodni ciąży). Mocz należy opróżnić przed operacją, trzymając obie ręce na biodrach i delikatnie obracając talię i brzuch. Następnie na wznak użyj ultradźwięku B do wykrycia pozycji, wybierz punkt nakłucia i nakłuj w ściśle aseptycznych warunkach operacyjnych. Zasadniczo pobiera się około 20 ml płynu owodniowego i umieszcza w czystej i sterylnej probówce wirówkowej w celu natychmiastowej kontroli. Proces kontroli (1) Weź 15 do 30 ml płynu owodniowego przez 16 do 20 tygodni ciąży i wiruj przy 1000 r / ml przez 10 min. (2) Odrzuć nadmiar supernatantu, zostaw 1 ml płynu owodniowego i wytrąconych komórek i delikatnie zdysperguj w zawiesinie komórkowej. (3) Przenieść do 25 ml kwadratowej kolby hodowlanej, dodać 3 ml pożywki o pH 6,5 do 6,8 (zawierającej 100 U / ml penicyliny, streptomycyny 100 μg / ml) i 1 ml surowicy cielęcej i inkubować w inkubatorze w 37 ° C. (4) Po 7-10 dniach hodowli zaobserwowano dużą liczbę kolonii komórek podobnych do fibroblastów lub nabłonkowych. Świeżą pożywkę można w tym momencie wymienić. (5) Gdy kolonie komórkowe są ekspandowane na kawałki i istnieje wiele półprzezroczystych okrągłych dzielących się komórek, można dodać kolchicynę, aby uzyskać końcowe stężenie 0,1-0,3 μg / ml, a następnie hodować w inkubatorze w 37 ° C przez 5-6 godzin. (Wszystkie powyższe procedury są przeprowadzane w warunkach aseptycznych). Standardy zbioru: 1 z fibroblastami jako głównym rodzajem wzrostu komórek; 2 z 10-krotnymi okularami i 20-krotną obserwacją obiektywów, rosnące klony komórkowe pokrywają 1 lub więcej pełnych pól widzenia; 3 patrz więcej niż 10 półprzezroczystych Okrągłe komórki i ponad 10 podwójnie okrągłych jasnych dzielących komórek. (6) Jeśli komórki nie rosną energicznie, cykl wzrostu nie jest jednorodny lub komórki starzeją się, a standard zbioru nie zostanie osiągnięty, subkulturę można kontynuować w oryginalnej butelce. Metoda: W sterylnych warunkach najpierw wylano roztwór kultury i dodano kilka kropli sterylnego roztworu trypsyny o masie 2,5 g / l, i mieszaninę wytrząsano i wlano. Następnie dodano 5 do 10 kropli trypsyny i delikatnie wytrząsano w 37 ° C przez około 5 minut, aby spowodować odpadnięcie przylegających komórek. Dodano 4 ml świeżej pożywki zawierającej surowicę cielęcą i hodowlę pozostawiono do odstania w 37 ° C na 4 do 5 godzin. Ostrożnie zmień pożywkę hodowlaną i kontynuuj hodowlę, którą można zebrać 3 do 5 dni po pasażu. (7) Przenieść roztwór kultury do probówki z podziałką, dodać 1 ml roztworu ED-TA-trypsyny do kolby, umieścić w inkubatorze w 37 ° C na 5 minut, a następnie przepłukać przylegające komórki za pomocą pipety łokciowej (2,5 g / można również użyć) L trawienie roztworem trypsyny). Komórki odłączone od ścianki butelki wlano do probówki wirówkowej, zmieszano z oryginalną fazą płynną hodowli, a kolbę hodowlaną przemyto niewielką ilością ciepłej soli fizjologicznej, a przemyte komórki wlano również do probówki wirówkowej i wirowano przy 1000 r / min przez 10 minut. (8) Odessać supernatant, dodać 3 do 5 ml hipotonicznego roztworu KCl o stężeniu 0,075 mol / L wstępnie ogrzanego do 37 ° C i ustawić w 37 ° C na 10 do 15 minut. (9) Prefiksja, fiksacja i przygotowanie są takie same, jak metoda przygotowania próbek chromosomów krwi obwodowej. Nie nadaje się dla tłumu Ludzie tabu: 1. Podczas ciąży wystąpiły oznaki aborcji. 2. Gdy temperatura ciała przekroczy 37,5 ° C. 3. Wczesne złuszczanie łożyska, zakażenie brzucha i ropne. Działania niepożądane i ryzyko (1) Uraz matki: nakłucie igły wbite w naczynia krwionośne z powodu krwiaka ściany brzucha krwiak podtwardówki macicy. Czasami płyn owodniowy dostaje się do krążenia krwi matki z dziury nakłucia i powoduje zatorowość płynu owodniowego. Pęcherz nie został opróżniony przed nakłuciem, a pęcherz został zraniony. (2) Uraz płodu, łożyska i pępowiny: Igła do nakłuwania może uszkodzić płód i może powodować krwawienie, a łożysko i pępowina mogą również powodować krwawienie lub krwiak. Dlatego podczas przyjmowania krwotocznego płynu owodniowego należy zidentyfikować źródło krwawienia. Jeśli podejrzewasz, że jesteś z płodu, powinieneś nadal słuchać serca płodu. (3) Wyciek płynu owodniowego: pooperacyjny wyciek płynu owodniowego powoduje wyciek z otworków, powodując zbyt mało płynu owodniowego, wpływając na rozwój płodu, a nawet powodując poronienie lub przedwczesny poród. (4) aborcja lub przedwczesny poród: częstość aborcji lub przedwczesnego porodu wynosi 0,1% -0,2%, często występuje w ciągu tygodnia po operacji, nawet po nakłuciu, przedwczesne pęknięcie błon prowadzi do przedwczesnego porodu. (5) zakażenie wewnątrzmaciczne: po operacji może wystąpić gorączka matki. Infekcja wewnątrzmaciczna może powodować nieprawidłowy rozwój płodu, a nawet śmierć płodu. Dlatego amniopunkcja powinna być ściśle aseptyczna.

Materiały na tej stronie mają na celu ogólne wykorzystanie informacyjne i nie stanowią porady medycznej, prawdopodobnej diagnozy ani zalecanych metod leczenia.