electroforesis de hemoglobina

Diferentes puntos isoeléctricos de diversas hemoglobina tienen diferentes cargas positivas y negativas en un determinado tampón de pH, y la hemoglobina se mueve en diferentes direcciones después de la electroforesis. Información básica Clasificación de especialistas: clasificación de exámenes de crecimiento y desarrollo: examen de sangre Género aplicable: si los hombres y las mujeres aplican el ayuno: ayuno Consejos: Antes del examen, la dieta es ligera y el alcohol está prohibido. Valor normal El método de electroforesis fue HbA 95%, HbA 21.1% a 3.2% y HbA 32% a 3%. El método Singer tiene una HbF <4%. Importancia clínica 1, el componente principal es HbS, y no se puede ver HbB en la enfermedad de hemoglobina falciforme. 2, HbS, HbF y HbA2 aumentaron levemente, mientras que HbA raramente o desapareció, combinado con la investigación se puede diagnosticar como anemia de HbS-β-marina, más común en el Mediterráneo. 3, además de HbS, que contiene 10% -30% de HbA y HbF y HbA2 ligeramente aumentadas, también se puede considerar la anemia marina HbS-β. 4. HbS representa el 20% -30%, HbA representa el 65% -75% y contiene HbF y HbA2 normales, que pueden diagnosticarse como anemia de HbS-α-marina. 5, HbA desaparece, HbC representa el 28% -44% de la hemoglobina total, se puede diagnosticar como enfermedad de hemoglobina, más común en personas de raza negra, se pueden ver más células diana en la sangre. 6, hay HbS, también aparece HbD, hay células objetivo en la película de sangre, se puede diagnosticar como enfermedad de hemoglobina D, más común en el norte de China. 7, la HbE produce electroforesis, puede diagnosticarse como enfermedad de hemoglobina E, que se encuentra principalmente en el sudeste asiático, India, etc., China es más común en el sur de Guangdong. Precauciones Electroforesis de membrana de fibra de ácido ceroso colorimetría directa Reactivo: Electroforesis con microhemoglobina de membrana de acetato de celulosa. Operación (1) La membrana de acetato de celulosa se cortó en 1/3 (4 cm x 8 cm) en tampón TEB durante 10 minutos o más. (2) Retire la película de acetato de celulosa y use un papel de filtro para eliminar el exceso de agua. Una pipeta de Hb absorbió 10 μl de sangre disuelta de 100 g / L y se aplicó uniformemente al borde inferior del empujador de vidrio, y se colocó en el lado mate a una distancia de 1,5 a 2,0 cm del extremo del cátodo de la película. Haga dos copias de cada muestra al mismo tiempo. (3) Electroforesis: el tampón se somete a electroforesis con una pequeña cantidad de hemoglobina. El voltaje es de 180V y el tiempo es de 40min ~ 1h. (Las células están claramente separadas en cada zona). Después de la electroforesis, los electrodos se intercambian y el tampón se puede usar repetidamente. (4) Elución y cuantificación HbA, HbA2 y una zona de control correspondiente al tamaño de HbA2 se cortaron por separado. Si las zonas anormales de Hb (HbX) también se cortan al mismo tiempo, se colocan en los tubos correspondientes. Agregue 10 ml de tampón TEB al tubo de HbA, agregue 2 ml de tampón TEB a cada tubo, remoje durante 30 minutos, agite constantemente. Después de ser completamente eluido. El eluato se mezcló con un espectrofotómetro 721 con una longitud de onda de 413 nm. El blanco se pone a cero y se mide la absorbancia de cada tubo. Proceso de inspección (1) Electroforesis de hemoglobina traza: 1 Película de inmersión: la película de acetato de celulosa flota sobre la superficie del tampón TEB, y se puede usar durante al menos 20 minutos después de empaparla y hundirla de manera uniforme. Esto evita que se generen burbujas. 2 puntos: retire la película de acetato de celulosa y utilice papel de filtro para eliminar el exceso de agua. La solución de hemoglobina se aspiró en una micropipeta y se colocó en una ranura cóncava de un aplicador de muestras múltiples. La solución de hemoglobina se tomó con una pipeta de muestras múltiples y se colocó en un lado mate de la película de acetato de celulosa. 1.5 a 2 cm desde el extremo del cátodo, la cantidad de manchas es de aproximadamente 3 a 5 μl, y la solución de hemoglobina normal en la posición paralela se usa como control. 3 Electroforesis: Agregue una cantidad igual de solución de tampón BB en el tanque de tampón a ambos lados del tanque de microelectroforesis, y use un papel de filtro de dos capas como un puente de sal en el soporte de membrana de acetato de celulosa. La película fue mate hasta el fondo, y el electrodo negativo se terminó por un punto y se equilibró durante 5 minutos. Enciende el poder. El voltaje es de 180V, la cantidad de corriente es de aproximadamente 0.2mA / cm, y el tiempo de electroforesis es de 20-30min. El tampón en el tanque se puede usar una vez más después de cambiar los electrodos. 4 Tinción: la película sometida a electroforesis se retiró en la solución de tinción roja Ponceau durante aproximadamente 10 minutos, y se lavó con ácido acético al 3% varias veces hasta que el fondo se volvió blanco y seco. 5 Transparente: la película de acetato de celulosa se empapa en un líquido transparente, se adhiere a una placa de vidrio limpia, y las burbujas entre los dos se eliminan mediante una varilla de vidrio. Se vertió una pequeña cantidad de ácido acético glacial en un cilindro de cromatografía, y la placa de vidrio se cubrió inversamente en el cilindro de cromatografía (con la película mirando hacia adentro). Fume con ácido acético glacial volátil durante 10 a 20 minutos y retire la película cuando sea transparente. (2) Método colorimétrico de tinción por electroforesis con membrana de acetato de celulosa: 1 Retire la membrana de acetato de celulosa de 4 cm × 6 cm empapada en tampón TEB y seque el exceso de agua con papel de filtro. A una distancia de 1,5 cm del extremo del cátodo de la superficie mate, se empacaron lineal y uniformemente con una pipeta de hemoglobina aproximadamente 5 μl de una solución de Hb de 50 g / L. Después de que la solución de hemoglobina penetrara en la membrana, la membrana se invirtió en un puente de papel de filtro de la placa de soporte del tanque de electroforesis. 2 Electroforesis: voltaje 180V, tiempo 30 ~ 40min, sujeto a la separación completa de las zonas de Hb. El electrodo se intercambia después de la electroforesis y el tampón de electroforesis se puede usar varias veces. 3 Teñido: la película se sumerge en la solución de teñido. Debe teñirse durante 2 horas en invierno y entre 25 y 30 ° C en verano. Solo se puede teñir durante unos 30 minutos. Tenga en cuenta que si la tinción no es transparente (como el tiempo es demasiado corto o la solución de hemoglobina está demasiado concentrada), o el voltaje es demasiado alto, la banda de HbA está demasiado concentrada y la cinta se despega fácilmente, lo que afecta la precisión de la cuantificación. Lave con solución blanqueadora varias veces hasta que se enjuague el fondo. 4 Cuantificación: se sacó la membrana enjuagada, se cortó cada zona y se colocó una zona de control correspondiente al tamaño de HbA2 en cada tubo de ensayo correspondiente. Se añadieron 10 ml del lixiviado al tubo de HbA, y los tubos restantes se sumergieron en 2 ml, se remojaron durante 20 minutos y se agitaron ocasionalmente. Haga que la cinta se eluya por completo (tenga en cuenta que a temperaturas más altas, el tiempo de elución no debe ser demasiado largo; de lo contrario, el eluyente azul disminuirá y gradualmente se volverá púrpura). El eluato se mezcló y se midió la absorbancia de cada tubo usando un espectrofotómetro 721 a una longitud de onda de 620 nm y puesta a cero con un blanco. 5 cálculo: la misma colorimetría directa. Electroforesis de membrana de fibra de ácido ceroso colorimetría directa Reactivo: Electroforesis con microhemoglobina de membrana de acetato de celulosa. Operación (1) La membrana de acetato de celulosa se cortó en 1/3 (4 cm x 8 cm) en tampón TEB durante 10 minutos o más. (2) Retire la película de acetato de celulosa y use un papel de filtro para eliminar el exceso de agua. Una pipeta de Hb absorbió 10 μl de sangre disuelta de 100 g / L y se aplicó uniformemente al borde inferior del empujador de vidrio, y se colocó en el lado mate a una distancia de 1,5 a 2,0 cm del extremo del cátodo de la película. Haga dos copias de cada muestra al mismo tiempo. (3) Electroforesis: electroforesis de tampón y micro hemoglobina. El voltaje es de 180V y el tiempo es de 40min ~ 1h. (Las células están claramente separadas en cada zona). Después de la electroforesis, los electrodos se intercambian y el tampón se puede usar repetidamente. (4) Elución y cuantificación HbA, HbA2 y una zona de control correspondiente al tamaño de HbA2 se cortaron por separado. Si las zonas anormales de Hb (HbX) también se cortan al mismo tiempo, se colocan en los tubos correspondientes. Agregue 10 ml de tampón TEB al tubo de HbA, agregue 2 ml de tampón TEB a cada tubo, remoje durante 30 minutos, agite constantemente. Después de ser completamente eluido. El eluato se mezcló con un espectrofotómetro 721 con una longitud de onda de 413 nm. El blanco se pone a cero y se mide la absorbancia de cada tubo. No apto para la multitud. No hay tabúes. Reacciones adversas y riesgos Riesgo de infección: si usa una aguja sucia, puede estar en riesgo de infección.

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