apolipoproteína AⅡ

La apolipoproteína es una fracción de lipoproteínas plasmáticas que contiene una variedad de lipoproteínas y varias apolipoproteínas específicas diferentes. Hay más de 20 tipos de apolipoproteínas que se han descubierto hasta ahora. Entre ellos, hay principalmente aPOA1, AII, B-100, B48, CI, CII, CIII, D, E y similares. Información básica Clasificación del especialista: clasificación del examen cardiovascular: examen bioquímico Género aplicable: si los hombres y las mujeres aplican el ayuno: ayuno Consejos: En la última comida antes de la extracción de sangre, evite los alimentos y bebidas con alto contenido de grasa, ayunando 12 horas, extraiga sangre venosa del antebrazo. Valor normal 250 ~ 520mg / L. Importancia clínica Reducción de la enfermedad coronaria, diabetes, síndrome nefrótico, deficiencia hereditaria de ApoA-I (enfermedad de Tánger), alfa-lipoproteinemia familiar baja, enfermedad de ojo de pez, desnutrición severa, hepatitis activa y función hepática. Los resultados bajos pueden ser enfermedades: enfermedad coronaria, consideraciones de diabetes (1) Inmunoturbidimetría: 1 Con respecto al antisuero: el ensayo turbidimétrico tiene mayores requisitos de antisuero que otros métodos. El método turbidimétrico es preferiblemente un anticuerpo policlonal. El antisuero debe estar libre de antisuero. Debe prestar mucha atención a la apoA-II extraída del suero humano para lograr inmunopureza, pureza cromatográfica y pureza de electroforesis, lo que no es posible en el laboratorio general. El título de antisuero (título) no debe ser inferior a 16. En la actualidad, en algunos reactivos comerciales nacionales, el antisuero apoA-II tiene un título extremadamente bajo, por lo que debe prestar atención al comprar el kit. Si no tiene experiencia en la identificación de la calidad de antisueros antes de la compra, debe solicitar a la unidad calificada que la identifique. 2 La muestra estándar superior (suero) se diluye 200 veces para operación manual (100 μl de muestra), y si hay una muestra de precisión, se puede diluir 20 veces (usando 10 μl). Para adaptarse a las condiciones de diferentes laboratorios (como diferentes tipos de instrumentos automatizados), se debe prestar atención a la proporción de antígeno-anticuerpo al realizar las modificaciones apropiadas. Se debe tener en cuenta que no debe haber exceso de antígeno en el sistema de reacción, y el límite superior lineal no debe ser inferior a 2.5 g / L. En otras palabras, la cantidad de antisuero debe ser suficiente, de lo contrario los resultados son bajos cuando la apoA-I es alta en la muestra. En la actualidad, algunos kits de medicamentos domésticos no solo tienen un bajo título antisuero, sino que la dosis de las muestras en la operación es demasiado grande (como 3 ~ 5 μl), el anticuerpo es obviamente insuficiente y los resultados medidos son inevitablemente inexactos. 3 Para lograr una medición precisa, los resultados del cálculo de la curva de calibración deben realizarse en la medición de turbidez apoA-II y B (método de punto final). Una cierta concentración de rango (dosis de muestra baja) (X) es básicamente lineal con turbidez (Y), y la regresión lineal calcula una cierta intersección en el eje Y (valor A <0.1), por lo que la desviación del resultado del cálculo se calcula mediante calibración de punto único. Más grande, los resultados medidos no pueden reflejar con precisión el nivel de alto (alto bajo, bajo alto). No descuide la precisión de la medición debido a la simplicidad del método de punto único. Independientemente del tipo de instrumento automatizado, primero debe probar la curva de calibración. Si la prueba se repite bajo las condiciones del instrumento y las condiciones específicas, la intercepción de la línea de regresión no es obvia, entonces se puede usar el método de calibración de punto único. Cuando la cantidad de la muestra es de 3 a 5 μl, incluso si se aumenta la cantidad de antisuero, la concentración y la turbidez no son lineales, y solo pueden calcularse después de que la curva se convierte linealmente. 4 El principal factor de interferencia es la turbidez del suero mismo (como el suero rico en grasas), y los métodos de pretratamiento como la ultracentrifugación o la hidrólisis de lipasa no son prácticos. El efecto de la turbidez con tensioactivos también es limitado, por lo que se debe hacer un tubo en blanco en el ensayo. Además del método de dos puntos utilizado en el análisis automatizado, es un error utilizar manualmente un solo reactivo sin restar la muestra en blanco. Para reducir el efecto de los efectos de la matriz en la respuesta de turbidez, se debe usar suero de valor fijo como calibrador. Además, se deben excluir las interferencias como partículas de polvo y rasguños turbios de platos. 5 Algunos kits comerciales (incluidos algunos productos importados) con valores de suero de calibración inexactos son una fuente importante de error. (2) Método de electroforesis en cohetes: 1 La relación de dilución del antígeno y la cantidad de antisuero deben seleccionarse de modo que el pico del cohete sea claro, la pendiente de la curva de calibración sea moderada y la línea sea adecuada. El método mide simultáneamente apoA-II y apoB, y la cantidad de los dos antisueros debe ajustarse de modo que las alturas máximas de los dos sean diferentes, y la altura máxima de apoB no sea inferior a 1 cm. 2 Los diferentes tipos de antisueros (como conejos y ovejas) se prueban al precio equivalente, y los resultados serán diferentes. El ensayo apoA-I es preferiblemente antisuero de conejo. Cuando se usa el suero de conejo, la forma del pico es nítida y el pico producido por el suero de oveja es grueso, la punta del pico es redonda y roma, y ​​a veces aparece una imagen fantasma antes del pico. La pendiente de la curva de calibración para el suero de calibración también es diferente. Sin embargo, no importa qué antisuero se use, los resultados cuantitativos no son muy diferentes. 3 Electroforesis bajo ciertas condiciones, la altura máxima del suero de calibración de diferentes diluciones no cambiará significativamente, y la pendiente de la curva de calibración es básicamente la misma. Si la altura del pico de la muestra excede el rango de la curva de calibración, el factor de dilución de la muestra se debe ajustar y volver a analizar. El CV entre placas suele ser inferior al 5%. 4 Los resultados de la electroforesis en cohetes se pueden observar mediante tinción u observación visual directa del pico del cohete. El primero usa menos muestras y ahorra antisuero, pero si las muestras y el antisuero se incrementan adecuadamente, es más conveniente no manchar. La agarosa utilizada debe ser electroosmótica o hipotónica estándar. Agregar la cantidad adecuada de dextrano o polietilenglicol al gel aclarará el pico del cohete. 5 La medición del pico del cohete puede calcular el área o la altura del pico, y el área es la altura del pico multiplicada por el ancho del pico (el ancho a la mitad de la altura del pico). La precisión de la medición es preferiblemente de hasta 0,1 mm. Se deben utilizar equipos de amplificación mecánica o electrónica. La altura del pico en el rango de la curva estándar es preferiblemente de 1 a 4 cm. 6 Este método es aplicable al análisis de una pequeña cantidad de muestras. También es adecuado para la determinación de apoAII, CI, CII, CIII, D, E y Lp (a). Proceso de inspección Electroforesis de cohetes: 1 placa de colada: 10 g / L de agarosa 10 ml por placa, derretir en baño de agua hirviendo, mezclar bien, agregar 50 μl de antisuero apoA-II y 50 μl de antisuero apoB cuando esté frío a 50 ~ 55 ° C (la cantidad depende del título de antisuero) ), mezcle rápidamente y vierta sobre la placa de vidrio preestablecida en la plataforma de agua, enfríe y luego coloque a 4 ° C, después de 20 minutos, perfore orificios, el orificio está en el extremo del cátodo de la placa, el diámetro del orificio es de 3 mm, la separación del orificio es de al menos 5 mm y la capacidad del orificio es de 5 μl. Coloque la placa en el tanque de electroforesis y el puente con papel de filtro. 2 antígeno diluido: el suero de calibración se diluyó a 1: 100, 1: 150, 1: 200, 1: 300 y 1: 400 (para la curva de calibración) con solución de NaCl 0,15 mol / L, y la muestra de suero se diluyó 1: 200. Ponga el refrigerador a 4 ° C por no más de 3 días. 3 Carga: en el estado de baja corriente (10 mA / placa), diluya el suero fijo y las muestras para absorber 5 μl (exacto) y agréguelo bien a la muestra de gel de agarosa. Cada placa tiene que hacer una serie de estándares. 4 de potencia: flujo constante de 24 mA / placa, voltaje terminal de 6 ~ 8 V / cm, enfriamiento con agua corriente para mantener la agarosa a 15 ° C, electroforesis de 3 a 4 h. 5 proteína desproteinizada y película seca: la placa de agarosa después de la electroforesis se sumergió en 0,15 mol / l de NaCl durante 30 minutos, y la película se colocó sobre la película de poliéster, y el pegamento fue absorbido por el papel de filtro multicapa a presión suave. Humedezca, luego seque el papel de filtro, la película y la película de poliéster juntas, o séquelo con un soplador de aire caliente. 6 tinción: la película de agarosa se sumergió en la solución de tinción durante 20 a 30 minutos. 7 Descolorización: Remoje la película teñida con una solución decolorante hasta que el pico del cohete esté claro y el fondo sea básicamente incoloro. Se puede sujetar en dos piezas de celofán en agua y se puede almacenar durante mucho tiempo después del secado. También se puede remojar en agua corriente para eliminar el fondo. No apto para la multitud. Generalmente no hay multitudes. Reacciones adversas y riesgos 1. Infección: preste atención a la operación aséptica cuando recolecte muestras de sangre y detenga el sangrado después de la recolección de sangre para evitar la contaminación del agua y el líquido para evitar la infección local. 2, sangrado: después de que la sangre recibe un tiempo de compresión completo, especialmente coagulopatía, tendencia a sangrado, para evitar exudación subcutánea local, hematomas e hinchazón.

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