β-N-Acetylglucosaminidase

β-N-Acetylglucosaminidase (NAG) hydrolysiert β-N-Acetylglucosaminid und hydrolysiert auch β-N-Acetylgalactosamin. Das Enzym ist in verschiedenen Geweben, Organen, Körperflüssigkeiten und Blutzellen weit verbreitet und ist eine saure Hydrolase in Lysosomen. Die Messmethoden sind Kolorimetrie und Fluorometrie. Grundlegende Informationen Facharzteinstufung: Harnuntersuchung Einstufung: biochemische Untersuchung Anwendbares Geschlecht: ob Männer und Frauen Fasten anwenden: Fasten Analyseergebnisse: Unter dem normalen Wert: Selten. Normalwert: Serum β-N-Acetylglucosaminidase: 15,14-27,94 U / l Überdurchschnittlich: Nierentubuluskrankheit Schwermetalle (Quecksilber, Blei, Cadmium usw.) und arzneimittelinduzierte Nierenschäden, Ischämie, Hypoxie, Blutverlust, Schock usw. können eine Zunahme der NAG-Aktivität verursachen. Negativ: Positiv: Tipps: Je nach Ernährungszustand des ganzen Körpers werden Milch, Eier, Früchte, Sojamilch usw. in die Mahlzeit gegeben. Normalwert 1, kolorimetrisches p-Nitrophenol-Verfahren: Serum-NAG21,54 ± 6,4 U / l, Urin-NAG ist normalverteilt, der Median liegt bei 9,13 U / g Kreatinin, die 95-Perzentil-Obergrenze liegt bei 16,10 U / g Kreatinin. 2. Fluoreszenzmethode: Erwachsenenserum: 9,94 ± 2,7 U / l Erwachsener Urin: 6,39 ± 3,19 U / LCre. Klinische Bedeutung Die Bestimmung der NAG-Aktivität von Blut und Urin ist empfindlich gegenüber Veränderungen von Nierenparenchymläsionen, insbesondere akuten Verletzungen und aktiven Erkrankungen, und wird hauptsächlich zur Überwachung von Nierenverletzungen im Frühstadium und zur Krankheitsbeobachtung verwendet. 1, Nierentubuluskrankheit Schwermetalle (Quecksilber, Blei, Cadmium usw.) und arzneimittelbedingte Nierenschäden, Ischämie, Hypoxie, Blutverlust, Schock usw. können eine Zunahme der NAG-Aktivität verursachen. 2, Nephrotisches Syndrom Harn-NAG oft signifikant erhöht, die Remissionszeit verkürzt, schnelle Erholung bei Wiederauftreten, kann es als Indikation für die klinische Beobachtung verwendet werden. Die akute Phase der Glomerulonephritis ist sehr unterschiedlich, aber die Veränderung ist geringer als die der Nierentubulusverletzung. 3, der Ort der Harnwegsinfektion Diagnose von akuten und chronischen Pyelonephritis NAG Anstieg im Urin, kann von einfachen Blasenentzündung unterschieden werden. Kann zur Diagnose von frühen Infektionen der oberen Harnwege verwendet werden. 4, Nierentransplantatabstoßung Überwachung Nierentransplantatabstoßung frühen NAG kann erhöht werden, empfindlicher als Urinprotein, Serum-Kreatinin, Kreatinin-Clearance. 5, Früherkennung von diabetischer Nephropathie, diabetischer Nephropathie, erhöhtem Urin-NAG, Früherkennung dieser Krankheit ist besser als Albumin im Urin und β2-Mikroglobulin. Hohe Ergebnisse können Krankheiten sein: Nephrotisches Syndrom, Harnwegsinfektionen (1) Kolorimetrisches p-Nitrophenol-Verfahren: 1 Das Substrat p-Nitrophenol sollte gereinigt und 24 Stunden bei 50 ° C vorgeformt werden. Die Konzentration wurde mit 10 mmol / l NaOH auf 0,04 mmol / l eingestellt und die Absorptionskurve wurde mit einem Spektrophotometer mit enger Bandbreite, & lgr; max = 401 nm, gemäß dem IFCC-Standard, A & lgr; max = 0,7316 bis 0,7388 und E & lgr; max = 18380 ± 90 (25 ° C) abgetastet. 2 Die Löslichkeit des Substrats ist gering: Bei der Herstellung sollte es auf eine Paste mit einer geeigneten Menge Puffer mit einem pH-Wert von 4,6 eingestellt werden. 3 Wenn die Messergebnisse im ultralinearen Bereich liegen, sollte die Probe mit physiologischer Kochsalzlösung verdünnt und erneut getestet werden. Das Ergebnis wird mit dem Verdünnungsfaktor multipliziert. 4 Die Enzymkonzentration im Urin wird stark vom Urinvolumen beeinflusst. Das 24-Stunden-Urinvolumen sollte beibehalten werden. Wenn die Enzymausscheidungsrate anhand des Verhältnisses von NAG / g Kreatinin berechnet wird, wird sie nicht durch die Konzentration oder Verdünnung des Urins beeinflusst und es ist nicht erforderlich, 24 Stunden Urin zu lassen. (2) Fluoreszenzmethode: 1 Die Fluoreszenzmethode zur Messung von NAG verfügt über einen Haushaltskit, der eine hohe Empfindlichkeit aufweist und nicht durch Urin beeinflusst wird. 2 Es kann auch mit Shanghai No.3 Analytical Instrument Factory verwendet werden, um 930-Fluoreszenzphotometer, Anregungsfilter 360 und Emissionsfilter (400 + 450) mit zufriedenstellenden Ergebnissen herzustellen. 3 Die Konzentration jeder Komponente in der Enzymreaktionslösung beträgt: 1,33 mmol / l Substrat, 20 mmol / l Zitronensäure und 432 mmol / l Na2HPO. 4 In den Reagenzien verwendete Lösungsmittel sollten destilliertes Wasser sein, das Substrat sollte frei von 4 MU sein, BSA sollte frei von dem Enzym sein oder 2 Stunden lang auf 50 ° C erhitzt werden. 5 NAG im Serum ist bei 4 ° C mehrere Stunden bis mehrere Tage und bei -20 ° C mehrere Monate haltbar. Die Urinprobe war 1 Woche lang bei 4 ° C stabil, und es wurde auch Citrat-Antikoaguliertes Plasma verwendet. 6β-N-Acetylglucosaminid kann durch zwei Enzyme katalysiert werden, eines ist β-N-Acetylglucosaminidase (EC 3.2.1.30) und das andere ist β-N-Acetylglucosidase (EC3) .2.1.52) Für gereinigte Enzyme kann nur EC3.2.1.30 oder EC3.2.1.52 definiert werden. Das NAG, auf das in der einheimischen Literatur häufig Bezug genommen wird, ist streng nach dem verwendeten Substrat und nicht nach der Spezifität des Enzyms für das Substrat benannt. Daher wird die derzeitige ausländische Literatur häufig als β-N-Acetylglucosaminidase bezeichnet. Inspektionsprozess (1) Kolorimetrisches p-Nitrophenol-Mischen bei einer Wellenlänge von 405 nm, einem optischen Pfad von 1 cm, destilliertem Wasser Null, Ablesen der Extinktion jedes Röhrchens und Überprüfen der Standardkurve mit der Differenz von (AU-AC). 1 Das Substrat p-Nitrophenol sollte gereinigt und 24 Stunden bei 50 ° C vorgeformt werden. Die Konzentration wurde mit 10 mmol / l NaOH auf 0,04 mmol / l eingestellt und die Absorptionskurve wurde mit einem Spektrophotometer mit enger Bandbreite, & lgr; max = 401 nm, gemäß dem IFCC-Standard, A & lgr; max = 0,7316 bis 0,7388 und E & lgr; max = 18380 ± 90 (25 ° C) abgetastet. Molarer Absorptionskoeffizient nach p-Nitrophenol 2 Die Löslichkeit des Substrats ist gering: Bei der Herstellung sollte es auf eine Paste mit einer geeigneten Menge Puffer mit einem pH-Wert von 4,6 eingestellt werden. 3 Wenn die Messergebnisse im ultralinearen Bereich liegen, sollte die Probe mit physiologischer Kochsalzlösung verdünnt und erneut getestet werden. Das Ergebnis wird mit dem Verdünnungsfaktor multipliziert. 4 Die Enzymkonzentration im Urin wird stark vom Urinvolumen beeinflusst. Das 24-Stunden-Urinvolumen sollte beibehalten werden. Wenn die Enzymausscheidungsrate anhand des Verhältnisses von NAG / g Kreatinin berechnet wird, wird sie nicht durch die Konzentration oder Verdünnung des Urins beeinflusst und es ist nicht erforderlich, 24 Stunden Urin zu lassen. (2) Fluoreszenzspektrophotometrie: Zuerst Serum oder Urin mit einem Puffer verdünnen, der kein Rinderserumalbumin (BSA) enthält. Mischen, die Anregungswellenlänge beträgt 364 nm, die Emissionswellenlänge beträgt 448 nm, um den Flüssigkeitsnullabgleich zu stoppen, und die Fluoreszenzintensität des 6 & mgr; mol / L 4-MU-Röhrchens wird auf 100 eingestellt, und die Fluoreszenzintensität des Blindröhrchens und des Messröhrchens werden jeweils gemessen. 1 Die Fluoreszenzmethode zur Messung von NAG verfügt über einen Haushaltskit, der eine hohe Empfindlichkeit aufweist und nicht durch Urin beeinflusst wird. 2 Es kann auch mit Shanghai No.3 Analytical Instrument Factory verwendet werden, um 930-Fluoreszenzphotometer, Anregungsfilter 360 und Emissionsfilter (400 + 450) mit zufriedenstellenden Ergebnissen herzustellen. 3 Die Konzentration jeder Komponente in der Enzymreaktionslösung beträgt: 1,33 mmol / l Substrat, 20 mmol / l Zitronensäure und 432 mmol / l Na2HPO. 4 In den Reagenzien verwendete Lösungsmittel sollten destilliertes Wasser sein, das Substrat sollte frei von 4 MU sein, BSA sollte frei von dem Enzym sein oder 2 Stunden lang auf 50 ° C erhitzt werden. 5 NAG im Serum ist bei 4 ° C mehrere Stunden bis mehrere Tage und bei -20 ° C mehrere Monate haltbar. Die Urinprobe war 1 Woche lang bei 4 ° C stabil, und es wurde auch Citrat-Antikoaguliertes Plasma verwendet. 6β-N-Acetylglucosaminid kann durch zwei Enzyme katalysiert werden, eines ist β-N-Acetylglucosaminidase (EC 3.2.1.30) und das andere ist β-N-Acetylglucosidase (EC3) .2.1.52) Für gereinigte Enzyme kann nur EC3.2.1.30 oder EC3.2.1.52 definiert werden. Das NAG, auf das in der einheimischen Literatur häufig Bezug genommen wird, ist streng nach dem verwendeten Substrat und nicht nach der Spezifität des Enzyms für das Substrat benannt. Daher wird die derzeitige ausländische Literatur häufig als β-N-Acetylglucosaminidase bezeichnet.

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