Gonoré

Introduktion til gonoré Gonoré er en purulent infektion i kønsorganet, forårsaget af Neisseria gonorrhoeae (benævnt Neisseria gonorrhoeae). Det kan også invadere øjne, svælg, rektum og bækken samt spredte infektioner. Det er en af ​​de mest almindelige seksuelt overførte sygdomme. . Gonoré overføres gennem samleje, og et lille antal kan også overføres gennem patientens pus-forurenende stoffer, som kan overføres til babyen gennem fødselskanalen. Grundlæggende viden Andelen af ​​sygdom: 0,012% Modtagelige mennesker: forekommer mest hos unge mænd og kvinder Transmissionstilstand: seksuelt overført kontakt Komplikationer: Prostatitis, seminal vesiculitis, epididymitis, urethritis, urethral strikure, bækkeninflammatorisk sygdom, bækkenabcesser, mavesmerter

Årsag til gonoré

Morfologi og farvning (25%):

Neisseria gonorrhoeae er ovale eller bønneformede. Længden af ​​bakterierne er 0,6-0,8 μm og bredden er ca. 0,5 μm. De er ofte arrangeret i par, og de tilstødende flader er flade eller let konkave, ligesom to bønner parret sammen, ingen flageller, ingen sporer. I kroppen med akut infektion er dens morfologi mere typisk, for det meste i cytoplasma, i den kroniske fase er uden for cellen, er gonococcal Gram-pletten negativ, når de farves med alkalisk methylenblå, er bakterierne blå, farvet med Pappehheim Saathof På det tidspunkt er cellerne røde, og baggrunden er himmelblå, hvilket er meget tydeligt. Neisseria gonorrhoeae har fem forskellige koloniformer på kunstigt medium, nemlig T1, T2, T3, T4, T5, hvoraf T1 og T2 er virulens, T3 og T4 er sterilt hår og kan ikke inficere mennesker.

Cellestruktur (20%):

Patogeniciteten af ​​Neisseria gonorrhoeae er tæt knyttet til strukturen uden for cellerne. Den ydre struktur af Neisseria gonorrhoeae er den ydre membran. De vigtigste komponenter i den ydre membran er membranproteiner, lipopolysaccharid og pili, og membranproteiner kan klæbe fast til det humane slimhinde. Gennem cellefagocytose i humane celler, multiplikation i cellerne, hvilket fører til celle desintegration, gonococcal spredt til submucosa for at forårsage infektion, pili har en tendens til at klæbe til overfladen af ​​livmoderhulen og orale epitelceller, patogene og infektiøse.

Modstand (25%):

Neisseria gonorrhoeae er mere delikat, mest bange for tørhed, velegnet til vækst under fugtighed, temperatur på 35 ~ 36 ° C, der indeholder 2,5% ~ 5,0% kuldioxid, den optimale pH for vækst er 7,0 ~ 7,5, de fysisk-kemiske faktorer af Neisseria gonorrhoeae Modstanden er temmelig dårlig. Den dør inden for 1 ~ 2 timer i et helt tørt miljø. Hvis det er fastgjort til undertøjet og strøet, kan det overleve i 18 til 24 timer. Det kan overleve i flere dage på tykke pus eller våde genstande. 50 ° C kan kun overleve i 5 minutter, Neisseria gonorrhoeae er meget svag mod almindeligt anvendte mucobakterielle fungicider, det er især følsomt over for opløselige sølvsalte, 1: 4000 sølvnitratopløsning kan få det til at dø inden for 7 min, så Neisseria gonorrhoeae i pus 2min Inden for dødsfaldet kan 1% phenol (kulsyre) opløsning dræbe den inden for 3 min. Ud over den resistente stamme er Neisseria gonorrhoeae følsom over for antibiotika, men den mindste hæmmende koncentration af antibiotika forbedres gradvist.

Patogenet er neisseria gonorrhoeae, også kendt som gonococcus, kaldet Neisseria gonorrhoeae, der tilhører familien Neisseria, Neisseria.

1. Fandt, at Neisser i 1879 isolerede gonoré fra 35 sekretioner af akut urethritis, vaginitis og neonatal akut konjunktivitis. I 1885 blev Bumm anvendt i humant, bovint eller får-koagulationsserummedium. Dyrkningen af ​​Neisseria gonorrhoeae var vellykket, og de samme symptomer kunne frembringes ved inokulering af stammen i urinrøret hos sunde mennesker. På dette tidspunkt blev konklusionen om, at Neisseria gonorrhoeae er patogenet af gonoré, blevet konstateret.

2. Kultur og biokemiske egenskaber vokser godt på medium, der indeholder animalsk protein, såsom blod, serum, æggeblomme, ascites osv. Den egnede temperatur til kultur er 35-36 ° C, passende pH er 7,5, og det skal dyrkes i 5% kuldioxidmiljø. .

I den menneskelige urinrør kan glukose fermenteres, men fructose kan ikke fermenteres, og derfor kan denne egenskab bruges som en glukosefermenteringstest til at identificere sig med meningococcus, som ikke producerer en sputmatrix og hydrogensulfid. Produktionen af ​​oxidaser har en vis betydning ved tidlig identifikation.

3. Næringsindhold Klassificering I henhold til aminosyre- og nukleinsyrenæringsfundamentet, der kræves til gonokokkalkultur, kan Neisseria gonorrhoeae opdeles i 35 næringstyper, blandt hvilke Arg, Hyx, Ura type Neisseria gonorrhoeae kan forårsage asymptomatisk gonoré og formidlet gonoré. Resistent for serum, men følsom over for penicillin og andre lægemidler.

patogenese

(1) Affinitet til epitel: Neisseria gonorrhoeae har en særlig affinitet for søjleepitel og overgangsepitel.Den mandlige og kvindelige urinrøret, den kvindelige livmoderhals dækker det søjleepitel og det overgangsepitel, så det er modtageligt for gonokokk invasion, mens den mandlige vagina er Det lagdelte pladepitel er dækket med stærk modstand, generelt ikke invaderet, eller betændelsen er meget let, så gonokokk vaginitis er sjælden hos voksne kvinder. Fordi vaginal slimhinden er søjleepitel, er den unge pige modtagelige for infektion, og huden er ikke let gonokokk. Infektion, sjældne tilfælde af primær gonokokk hudinfektion, mennesker har ingen medfødt immunitet mod gonokokkbakterier, re-infektion kan forekomme efter genopretning.

(2) Adhæsion: Den specifikke receptor på gonococcal pili kan binde til den tilsvarende del af slimhindecellen; det ydre membranprotein II kan formidle vedhæftningsprocessen; det kan også frigive IgAl-dekomponerende enzym for at modstå afvisning af cellen, således Neisseria gonorrhoeae og epitelceller klæber sig hurtigt til hinanden, og pH i mikromiljøet, ionbroen, hydrofob struktur og kønshormoner kan også fremme vedhæftningsprocessen.

(3) Invasion og infektion: Neisseria gonorrhoeae adsorberes på mikrovilli af epitelceller, og det ydre membranprotein I overføres til cellemembranen, og derefter phagocytes Neisseria gonorrhoeae i cellerne, og Neisseria gonorrhoeae kan adsorberes på sædcellen, som hurtigt kan Stigende op til livmoderhalskanalen kan slim i livmoderhalsen midlertidigt forhindre Neisseria gonorrhoeae til livmoderhulen, og i livmoderhalsens søjle, vil det forårsage sygdom. Når gonokokcellerne invaderer cellerne, spreder de sig og beskadiger epitelcellerne. Cocci i submucosal rummet, der forårsager infektion i submucosa.

(4) Dannelse af læsioner: Neisseria gonorrhoeae invaderer det submucosale lag og fortsætter med at sprede sig. Det vil formere sig i den første generation inden for 36 timer. Gennem den synergistiske virkning af endotoksin-lipopolysaccharid, komplement og IgM, vil det danne en inflammatorisk reaktion, hvilket forårsager slimhindens rødme og hævelse og på samme tid på grund af hvide blodlegemer. Aggregation og død, nekrose og kaste af epitelceller, pus optrådte, og læsioner var mest alvorlige i kirtler og kryptåbninger.

(5) spredt spredning: betændelse forårsaget af gonokokkinfektion kan sprede sig langs urinvejen, kønsorganets spredning, hos mænd kan udvides til prostata, sædblærer, vas deferens og epididymis, hos kvinder kan sprede sig til livmoderen, æggeleder og bækken, alvorlig Neisseria gonorrhoeae kan komme ind i blodbanen og sprede sig til forskellige væv og organer i kroppen, hvilket kan føre til spredt infektion.

Gonoréforebyggelse

Forebyggelse af gonoré skal også bemærkes, at patienter med gonoré bør være forbudt at sove med børn, især piger, bade eller offentlige bade, badehåndklæder osv. I områder med høj udbredelse skal alle nyfødte behandles med sølvnitratopløsning eller andre effektive antibiotika. Øjendråber.

1. Fremme viden om seksuelt overførte sygdomme, fremme ædel moral og forbyde prostitution.

2. Brug et kondom for at reducere forekomsten af ​​gonokokkinfektion.

3. Profylaktisk brug af antibiotika kan reducere risikoen for infektion Du kan tage norfloxacin eller amoxicillin før og efter et samleje, hvilket effektivt kan forhindre seksuelt overførte infektioner.

4. Seksuelle partnere behandles på samme tid.

5. Patienter lægger mærke til personlig hygiejne og isolering, ikke til seng med familie, børn, især piger og bad.

6. Implementere et system af neonatal sølvnitratopløsning eller andre antibiotiske dråber for at forhindre gonokokk ophthalmia.

Gonorékomplikationer Komplikationer Prostatitis Seminal vesiculitis Epididymitis Urethritis Urethral striktur Bekæmmelsesbetændelse i bækkenet Bekkenabcesser Magesmerter

Mandlige gonorékomplikationer

1, gonoré kombineret med prostatitis symptomer: 1 dag eller en halv dag før begyndelsen af ​​akut prostatitis stopper ofte pus eller pus reduktion, patienter har høj feber, hyppig vandladning og smerter, rektal undersøgelse viste prostataforstørrelse, ømhed, urin Flydende uklarhed, hvis behandlingen ikke er rettidig, kan prostata danne abscesser, patienter med kronisk prostatitis har generelt ingen åbenlyse symptomer, den første vandladning efter at have vågnet op, urinrørsåbningen har et tætningsfænomen, en lille mængde hvide sekret udskilles, når penis klemmes, sekretioner Undersøgelse kan afsløre epitelceller, et par pusceller og gonococcus.

2, gonoré kombineret med seminal vesiculitis symptomer: akut feber, hyppig vandladning, dysuri, terminal uringrumhed og blod, rektal undersøgelse kan berøre den hævede sædblære og svær ømhed, kroniske symptomer, ingen rektal undersøgelse Det viser, at sædblæren er hård og fibrotisk.

3, gonoré med epididymitis symptomer: generelt kombineret med akut urethritis, ensidig, for det meste lav feber, epididymal hævelse og ømhed, ipsilateral lysken og nedre del af maven har reflekssmerter, palpation viser epididymal hævelse, der er Intens ømhed, urin turbiditet.

4, mandlig gonorrhea kan kombineres med urethral strengering: gentagen gonoré kan forårsage urethral strengering, et lille antal vas deferens eller endda infarkt, og derefter sekundær sædcyst og infertilitet.

Kvindelige gonorékomplikationer

Kvindelig gonoré og symptomer på gonokokkebækken inflammatorisk sygdom, herunder akut salpingitis, endometritis, sekundær æggeledelse i æggestokkene og bækken abscess forårsaget af brud, peritonitis osv. På grund af behandling, mishandling, kvindelige gonoré patienter, ekstrem Det er let at udvikle sig fra genitourinær infektion til bækken- og tilbehørinfektioner, hvilket medfører alvorlige konsekvenser såsom infertilitet, mavesmerter og endda livstruende.

Symptomer på gonoré Almindelige symptomer Mangel på rygsmerter, hvidt slim, urin, kvalme, libido, svær smerte, betændelse, appetitløshed, anal kløe

De kliniske manifestationer af gonokokkinfektion afhænger af infektionsgraden, følsomheden af ​​organismen, bakteriens virulens, infektionens placering og infektionslængden. Samtidig er det relateret til kroppens sundhed, om seksuel liv er overdreven og alkoholisme. Ifølge kliniske manifestationer kan gonoré opdeles i ingen gonoré og comorbid gonoré, asymptomatisk og symptomatisk gonoré, spredt gonoré og akut og kronisk gonoré.

For det første ingen komplikation gonoré

(a) han ingen komplikation gonoré

Akut gonococcal urethritis (akut gonoré): Inkubationsperioden er 1-14 dage, ofte 2-5 dage. Fra begyndelsen, akut urethritis, rødme, kløe og let prikken i urinrøret, efterfulgt af tyndt slimudløb, hvilket medførte vandladning ved urinering. Efter ca. 2 dage blev sekretionen klistret, urinrøret løb over, og pus var dyb. Gul eller gulgrøn, ledsaget af øgede symptomer på urinvejsankomfort, rødme og hævelse udviklet sig gennem penisens glans og en del af urinrøret, hyppig vandladning, uopsættelighed, dysuri, vandladning, besværlig bevægelse og hyppige erektioner af penis om natten. Der kan være hævelse af de inguinale lymfeknuder, rødme og smerter og kan også være purulent. Den første uge med akutte symptomer er den mest alvorlige. Hvis symptomerne ikke behandles, falder eller forsvinder symptomerne gradvist efter cirka en måned. To uger efter begyndelsen af ​​akut anteriøs urethritis har ca. 50-70% af patienterne gonokokk invasion af den bageste urinrør, der er kendetegnet ved urinbesvær, hyppig vandladning og akut urinretention. Det karakteristiske ved dysuri er, at smerter eller smerter forværres i slutningen af ​​vandladningen, og at det er akupunkturlignende. Nogle gange er der en perineaær smerte, og der kan ikke være nogen hæmaturi. Efter 1-2 uger forsvandt symptomerne gradvist. Systemiske symptomer er generelt milde, nogle få kan have feber op til 38 ° C, generel ubehag, tab af appetit og så videre.

Kronisk gonococcal urethritis (kronisk gonoré): Symptomer, der varer mere end 2 måneder, kaldes kronisk gonococcal urethritis. Da behandlingen ikke er grundig, kan Neisseria gonorrhoeae skjules i urinrørlegemet, parauretrale kirtler og urinrørskrypt for at gøre sygdomsforløbet kronisk. Hvis patientens konstitution er svag, der lider af anæmi, tuberkulose, begynder tilstanden med en kronisk proces, for det meste for den forreste og posterior urinrørsinfektion, god invasion af urinrøret pære, membran og prostata. Kliniske manifestationer af urinrøret har ofte kløefølelse, brændende fornemmelse eller let prikken, fin urinstrømning, vandladningssvaghed, drypp. De fleste patienter har en lille mængde serøs sputumforsegling i urinvejene tidligt om morgenen. Hvis køns- eller penirødderne klemmes, strømmer det tynde slim over. Urinen er dybest set klar, men der er silke.

(2) Kvinder uden komplikation gonoré

Hoveddelen af ​​den primære gonokokkinfektion af kvinder er livmoderhalsen. Neisseria gonorrhoeae kan klæbe til det lagdelte pladepitel, infektionsstedet for Neisseria gonorrhoeae observeres i krydset mellem det pladskrævende epitel i livmoderhalsen. Patienter med gonorécervicitis har ofte ingen symptomer på et tidligt tidspunkt, så inkubationsperioden er vanskelig at bestemme. Cervikal overbelastning, ømhed, øget purulent sekret, ofte kønskløe og brændende fornemmelse, undertiden lavere mavesmerter og lændesmerter. Disse atypiske symptomer gør, at patienter ofte ikke går til klinikken, så de bliver den vigtigste kilde til infektion; gonokok urethritis forekommer ofte 2-5 dage efter samleje, urinvejsstopning, ømhed og purulent sekretion, mild Hyppig vandladning, uopsættelighed, dysuri, brændende fornemmelse under vandladning, purulent udflod i urinrøret; gonokok vestibulær kirtelbetændelse ofte ensidig, rødme og hævelse i åbningen af ​​kirtlen, alvorlig smerte, svær abscessdannelse Der er feber og andre systemiske symptomer; gonokokvaginitis er mindre almindelig, ældres symptomer er milde, nogle patienter har hævelse i maven, rygsmerter, vaginal udflod, nogle patienter har smerter i underlivet og menorrhagi; kvinder gonococcal vulva Vaginitis, manifesteret som vulvar og vaginal betændelse. Der er mere vaginal purulente sekretioner, undertiden gule og grønne sekretioner i skeden og urinrøret, smertefuld vandladning og rødme i vulva. Sekretioner kan strømme til anus og forårsage irritation. I alvorlige tilfælde kan det inficere endetarmen og forårsage gonococcal proctitis.

For det andet er der komplikationer af gonoré

(a) Mænd har comorbid gonoré:

Gonoréurethritis har forskellige komorbiditeter, hovedsageligt prostatitis, seminal vesiculitis, epididymitis.

1. Prostatitis: Akut prostatitis er forårsaget af udledningsrøret og kirtlen af ​​Neisseria gonorrhoeae, der kommer ind i prostata. Der er feber, kulderystelser, smerter i perineale og urinvejsinfektioner ledsaget af dysuri. Prostata er hævet og øm, når den undersøges. Neisseria gonorrhoeae er imidlertid ikke en almindelig årsag til akut prostatitis. Prostata forårsaget af Neisseria gonorrhoeae er hovedsageligt kendetegnet ved kroniske læsioner.Symptomerne er milde, der er perineale ubehag, smerter i penis, der er et "mund" -fenomen om morgenen urinrørsåbning, og lymfen i urinen ses. Prostata-massagevæsken har pus og lecithin. , udstrygning eller kultur for at finde gonococcus, analundersøgelse kan røre ved små knuder på prostata, og der er ubehag eller smerter, dræning af pus nær dræningsrøret for at danne arkontraktion påvirker ejakulation, hvilket resulterer i infertilitet.

2. Epididymitis: forekommer normalt efter akut urethritis, mest på den ene side. Der er lav feber, epididymis kvældesmerter, ipsilateral lysken og nedre del af maven har reflekssmerter, begyndelsen og testikelgrænserne er klare, gradvis uklare, testikel ømhed, hævelse, alvorlig ømhed. Urinen er ofte overskyet. Der kan være prostata og seminal vesiculitis på samme tid.

3. Seminal vesiculitis: feber, hyppig vandladning, uopsættelighed, dysuri, ingen urinering og blod. Rektal undersøgelse kan berøre den hævede sædblære og have alvorlig ømhed Kronisk seminal vesiculitis har generelt ingen symptomer. Rektal undersøgelse viser, at sædblæren er hård og fibrotisk.

4. Urethral kirtelbetændelse: forekommer i perineum eller omkring, der er fingerstørrelse knude, smerter, akut suppuration og ulceration, komprimering af urinrøret og dysuri, kan have systemiske symptomer såsom feber, langsom fremgang.

5. Urethral stringure: gentagne forfattere kan forårsage urethral stringure, et lille antal vas deferens eller obstruktion kan forekomme, dysuri, udtynding af urinvejene og svær urinretention. Sekundære vas deferenser, seminal vesikelcyster og infertilitet.

(2) Kvinder har comorbid gonoré

Den vigtigste komplikation af kvindelig gonoré er gonokokkeboksinflammation, såsom akut salpingitis, endometritis, sekundær æggeledelse i æggestokkene og bækken abscess forårsaget af brud, peritonitis. Pludselig begyndelse efter menstruation er der høj feber, kulderystelser, hovedpine, kvalme, opkast, smerter i underlivet, øget purulent leukæmi. Begge sider af tilbehøret er fortykket og mørt.

For det tredje andre dele af gonoré:

1. Gonoré conjunctivitis: Nyfødte forekommer mere end 2-3 dage efter fødslen, for det meste bilateral, øjenlågshevelse, purulent sekretion, voksne for det meste selvinokulation, ofte ensidig, viser den samme nyfødte. På grund af pusoverløbet, hvis "pustøje" er forsinket, er hornhinden dampende og hornhinden perforeret. Bly til blindhed.

2. gonokok faryngitis: hovedsageligt set i oralsex, den såkaldte "mund" vestlige homoseksuelle eller heteroseksuelle er mere almindelige, manifesteres som akut faryngitis eller akut betændelse i mandlen, lejlighedsvis feber og cervikal lymfadenopati. Der er symptomer som tørt ubehag i halsen, ondt i halsen, ondt i halsen.

3. Neisseria gonorrhea: hovedsageligt set i mandlig homoseksualitet. Kvinder er hovedsageligt forårsaget af vaginale infektioner. Bordet er presserende og tungt, der er pus og blod, slim i slimhinden i slimhinden, purulent sekretion, gonokokkkultur positiv.

Fjerde, formidlet gonokokkinfektion

Den spredte gonococcal-infektion skyldes spredning af gonococcal-bakterier gennem blodbanen til hele kroppen, hvilket resulterer i en mere alvorlig systemisk infektion. Forekomst er ca. 1% af patienter med gonoré. De fleste af de stammer, der forårsager spredt gonococcal-infektion, er AHU-næringsrige. Stammen har stabil modstand mod normalt humant serum. Derudover har normalt humant serum IgM-antistof mod gonococcal lipopolysaccharid. Ved hjælp af komplement er det stort. De fleste gonococcus har en bakteriedræbende virkning, og patienter, der mangler C5, C6, C7 og C8 komplementkomponenter, er tilbøjelige til gonococcal sepsis eller gonococcal meningitis.

(1) gonococcal sepsis: patienten begynder at have feber, kropstemperaturen kan være så høj som 40 ° C, men normalt mellem 38 ° C og 40 ° C, kulderystelser er ikke almindelige, nogle patienter har hudpapler, ecchymoser, pustler, hæmoragisk Eller nekrotiserende hudskader, nogle hudlæsioner har smerter. I læsionerne kan fluorescerende immunfarvning anvendes til at detektere væksten af ​​Neisseria gonorrhoeae eller dyrkede Neisseria gonorrhoeae og PCR til at detektere Neisseria gonorrhoeae DNA-positiv. Det patologiske væv i læsionen er overfladisk mavesår med dannelse af pus, diffus betændelse i dermis og subkutant væv, polymorphonuclear leukocytinfiltration, involvering af små blodkar, trombose og lokal nekrose.

(B) gonococcal arthritis: hævelse i led, smerter ved en eller flere septiske arthritis. Generelt asymmetrisk, sjældent involverer hofte-, skulder- og rygmarven. Leddevæsketest har tilstedeværelse af gonoré, hvilket kan føre til fibrose forårsaget af knogledød og stivhed i knogler og led.

(C) gonococcal keratosis: kan skyldes gonococcal eller dets toksiner, kan ikke finde gonococcal læsioner i hudlæsioner, ofte med gonococcal arthritis, hudlæsioner er gode for hænder og fødder, ankelsæl og talje . Laster eller plaques, der normalt er fladt og let kvældet, konisk, gul eller kobberrød eller grålig hvid. Hudlesionerne i palmar sputum viste liderlig hyperplasi og stor keratinisering.

(D) gonococcal endocarditis: gonococcal er hovedpatogenet for endocarditis i de første par årtier af antibiotisk brug, gonococcal endocarditis er næsten usynlig, gonococcal endocarditis og andre typer Endokarditis har de samme kliniske manifestationer. Endokarditis involverer ofte aorta eller mitral ventil, subakut eller akut endokarditis på grund af hurtig ødelæggelse af ventilen, hvilket fører til død.

(5) gonokokk meningitis: sjælden, kan være forbundet med gigt og et typisk udslæt for at skelne meningokokk meningitis.

For det femte påvirkningen af ​​gonoré på graviditet og nyfødte

Når en kvinde går gonoré med salpingitis, kan det føre til infertilitet. Hyppigheden af ​​infertilitet forårsaget af kvindelig gonoré er ca. 20%, og forekomsten af ​​infertilitet stiger med stigningen i antallet af infektioner. For kvinder, der er inficeret med gonoré mere end tre gange, kan forekomsten af ​​infertilitet nå op på 70%. Cervikal gonokokkebetændelse kan føre til tidlig brud på membraner, intra-fostervandsinfektion, intrauterin infektion, intrauterin væksthæmning og for tidlig fødsel. Nyfødte har høj sygelighed og dødelighed på grund af for tidlig fødsel, lav kropsvægt og sepsis. Opstrøms infektion af gonokokkbakterier efter fødslen kan forårsage endometritis, puerperal feber, svær postpartum sepsis, neonatal gonokok konjunktivitis og vaginal vaginal vulvitis.

Gonoréundersøgelse

Laboratorieinspektion:

Neisseria gonorrhoeae laboratorieundersøgelser inkluderer udstødning, kultur til kontrol af Neisseria gonorrhoeae, antigen-påvisning, medikamentfølsomhedstest og PPNG-bestemmelse og genetisk diagnose.

(1) Smøreundersøgelse:

Tag patientens urinrørsekretioner eller cervikale sekretioner for Gram-plet, og find Gram-negativ i polymorfonukleære leukocytter

Diplococcus, udstrygning til patienter med simpel gonococcal anterior urethritis med et stort antal purulente sekretioner, den positive rate af denne metode er omkring 90%, kan først diagnosticeres, kvindelige kolonudskillelser, flere bakterier, dårlig følsomhed og specificitet Den positive rate er kun 50-60%, og der er en falsk positiv. Derfor anbefaler Verdenssundhedsorganisationen at anvende en kulturmetode til at kontrollere kvindelige patienter. Kronisk gonoré har færre positive gonokokkbakterier i sekreterne, så den positive rate er lav. Derfor bør prostatamassageløsningen tages. Forøg detekteringshastigheden.

Pharyngeal udstrygning fandt, at Gram-negativ diplococcus ikke kunne diagnosticere gonoré, fordi andre Neisseria-arter er normale i svelget, og udtværet, der er positivt for atypiske symptomer, bør undersøges nærmere.

(2) Uddannelse og inspektion:

Neisseria gonorrhoeae-kultur er et vigtigt bevis for diagnose. Kulturmetoden er en følsom metode for mænd med milde eller asymptomatiske symptomer. Så længe kulturen er positiv, kan diagnosen bekræftes. Før den genetiske diagnose anbefales kulturen af ​​Verdenssundhedsorganisationen. Den eneste måde at screene efter gonoré er at bruge modificeret Thayer-Martin (TM) -medium og New York City (NYC) -medium. Den indenlandske brug af chokoladeagar eller blodagarmedium indeholder antibiotika, eventuelt Hæmmer væksten af ​​mange andre bakterier, kultur ved 36 ° C, 70% fugtighed, 5% -10% CO2 (lys) miljø, 24-48 timers observation, kolonimorfologi, gramfarvning, oxidation Identifikation ved enzymtest og sukkerfermenteringstest, den positive kulturhastighed er 80% -95% for mænd og 80-90% for kvinder.

(tre) antigendetektion

1. Fastfase-enzymimmunanalyse (EIA): Det kan bruges til at påvise gonokokkantigener i kliniske prøver.Det kan bruges i kvindepopulationer i områder med høj forekomst og kan ikke dyrkes eller prøver skal sendes i lang tid. At diagnosticere gonokokkinfektioner.

2. Direkte immunofluorescensassay: direkte påvisning ved påvisning af monoklonale antistoffer mod det ydre membranprotein I i Neisseria gonorrhoeae

Epidemisk fluorescensprøve, men i øjeblikket er følsomheden af ​​bipolære prøver af mandlige og kvinder ikke høj, specificiteten er dårlig og vurderingsniveauet for eksperimentatoren, så eksperimentet kan ikke anbefales til diagnose af gonokokkinfektion.

(fire) genetisk diagnose

1. Genprobesdiagnose af Neisseria gonorrhoeae

Proberne til gonococcal-genprober er: plasmid-DNA-prober, kromosomale genprober og rRNA-genprober.

(1) Plasmid-DNA-sonde

1 Skjult plasmid-DNA-sonde, Neisseria gonorrhoeae-plasmid er opdelt i tre typer: zygositetsplasmid, det største molekyle, 36 kb DNA; lægemiddelresistent plasmid består af to plasmider, henholdsvis DNA-længde 5,6 kb og 7,1 kb; skjult plasmid 4,2 kb, Det kryptiske plasmid er til stede i 96% af de kliniske isolater af Neisseria gonorrhoeae. Andre Neisserias indeholder ikke dette plasmid, så dets sekvens kan bruges som en specifik DNA-sonde til at detektere Neisseria gonorrhoeae. Torres bruger nukleinsyrehybridiseringsteknologi til at detektere Neisseria gonorrhoeae. For at skjule plasmidet blev sonden anvendt til at påvise 134 stammer af Neisseria gonorrhoeae og 131 beslægtede stammer. 124 stammer af Neisseria gonorrhoeae var positive til hybridisering, svarende til 93%. De kunne også krydsreagere med andre Neisseria-arter. Følsomhedstesten af ​​nålen viste, at 102 CFU Neisseria gonorrhoeae kunne påvises. Det blev bevist, at CPPB-gensekvensen i det kryptiske plasmid var i alle gonococcal-kromosomer (inklusive stammer uden plasmidet), så CPPB-gensonden har god specificitet og følsomhed. Sex, Torres et al., Anvendte CPPB-genproben til at påvise 201 kliniske prøver ved anvendelse af et ikke-radioaktivt digoxinmærkningssystem med følsomhed og specificitet på henholdsvis 95% og 98%.

2 lægemiddelresistent plasmid-DNA-sonde

Neisseria gonorrhoeae-resistente plasmider kan opdeles i:

1 Den toksinproducerende gonococcal-bakterie (PPNG) er positiv for ß-lactamase;

2 har et højt niveau af plasmid-medieret resistens over for tetracyclin gonococcal (TRNG).

PPNG-stammen blev først isoleret i laboratoriet i 1976. Stammen indeholder et gen, der koder for et serotoninproducerende enzym. Genet kan integreres i kromosomet eller i plasmid-DNA, og sidstnævnte kaldes for det meste det blå. Toxinenzymplasmid, to slags plasmider, henholdsvis 7,4 kb og 5,3 kb. Pescador designede en specifik sonde til påvisning af gonococcal ß-lactamase-gen i 1998, som blev mærket ved enzymkemiluminescens, flydende fase-hybridisering. Den fotometriske måling er mængden af ​​specifikke hybrider 104-105 CFU af PPNG-stamme kan påvises inden for 4 timer. Selvom TRNG-stammen er resistent over for tetracyklin, er den normalt følsom over for ß-lactamase og quinolon-antibiotika. Derfor i eksperimentet Følsomhedstesten kan klassificeres som følsomme bakterier Pescador bruger en oligonukleotidprobe mod tetracyclin gonococcal (TRNG) tetm-genet, som er medieret af tetracyclin, mærket med enzymkemiluminescens og hybridiseret i flydende fase. 1,5 × 104 CFu Neisseria gonorrhoeae indeholdende tetm-genet blev direkte påvist fra kliniske prøver.

(2) Kromosomsonde

Kromosomale prober inkluderer kendte genprober, såsom pili-DNA-prober og paI-genprober, der spiller vigtige roller i processen med gonokokkinfektion af humane celler; genprober med ukendt funktion, disse prober Sekvensen er komplementær til den specifikke sekvens af kromosomet, men funktionen af ​​disse gensekvenser er ikke kendt på nuværende tidspunkt. De ovennævnte to kromosomale prober har lavt detektionsnummer på grund af det lave kopiantal af den komplementære sekvens i Neisseria gonorrhoeae, så detekteringsfølsomheden er lav, så den anvendes generelt ikke, medmindre Der er særlige forskningsformål.

(3) rRNA-genprobe

RRNA-gensonden bruger et DNA, der er komplementært til rRNA som en sonde, og målsekvensen for sonden er en rRNA-sekvens, og gensonden for rRNA'et er kendetegnet ved:

1 kan øge følsomheden for probe-påvisning, rRNA-genprobe kan samtidig detektere rRNA-molekyler og DNA-molekyler

2rRNA er evolutionært konserveret;

3 hybridiseringsmetode er enkel og hurtig;

4 Da indholdet af rRNA er højt, behøver prøven ikke at beriges. Gonokok-detektionsproben PACE C, der er produceret af Gen-Probe i USA, bruger rRNA og dets gen som detektionsmål-sekvens og er radioaktivt mærket og kan detekteres inden for 2 timer. Peter brugte denne sonde til at detektere 395 kliniske prøver. Følsomheden og specificiteten var henholdsvis 92,9% og 99,4%. Han mente, at PACE C-systemet var en pålidelig metode til screening af gonokokkbakterier i kliniske prøver. Proben kan også detektere Asymptomatiske gonokokkinfektioner, som i øjeblikket er svære at opnå.

2, gonococcal genamplificeringsdetektion

Den ovenfor beskrevne sonderingsteknik detekterer gonococcal-metoden, skønt den har en stor forbedring i følsomhed, specificitet og bekvemmelighed end kulturmetoden, men den har stadig visse begrænsninger, såsom Neisseria gonorrhoeae, der kræver prøver i de fleste tilfælde. Koncentrationen er meget høj, og udseendet af PCR-teknologi og ligasekædereaktion forbedrer yderligere følsomheden ved at detektere Neisseria gonorrhoeae.Den har fordelene ved hurtig, følsom, specifik og enkel og kan direkte detektere en meget lille mængde patogener i kliniske prøver.

(1) Ekstraktion af Neisseria gonorrhoeae DNA

1 DNA-ekstraktion fra kultur

Den dyrkede Neisseria gonorrhoeae blev opløst i et alkalisk lysat i en koncentration på 102 cfu / ml. Lysatet bestod af 1 M NaCl, 1 M NaOH og 1% natriumdodecylsulfat. Lysatet blev blandet og kogt i 1 minut, derefter 100 ul. Det alkaliske lysat blev neutraliseret med 1 M Tris, pH 7,0, ekstraheret en gang med Tris-ligevægtsphenol, ekstraheret en gang med phenol-chloroform og derefter udfældet med absolut ethanol eller isopropanol. Det ekstraherede DNA blev opløst i 30 ul destilleret vand eller TE-puffer. I væsken.

2 ekstraktion af klinisk bomuldspindeprøve

Bomuldspinde med sekretionerne blev presset i 2 ml sterilt fysiologisk saltvand eller PBS-puffer i 1 minut for at opløse prøverne i opløsningen så meget som muligt, og bomuldspindene blev kasseret, og suspensionen var ved 2-3000 r / kg. Centrifuge i 5 minutter ved min., Aspirer supernatanten, og opløs cellerne igen i 100 μl 1 x PCR-puffer indeholdende 0,4% Tween 20 og 200 μg / ml proteinase K. Cellsuspensionen blev opvarmet til 50-60 ° C i 1 time og derefter opvarmet til 95 ° C i 10 minutter. Den inaktiverede proteinase K blev centrifugeret ved 12000 r / min i 10 minutter, og supernatanten indeholdt en DNA-skabelon.

(2) Design af PCR-primere

Da CPPB-genet fra Neisseria gonorrhoeae er til stede i gonococcal-kromosomet og i det 4,2 kb kryptiske plasmid og i 96% af Neisseria gonorrhoeae, er mange PCR-primere designet i CPPB-genregionen.

Målgenprimersekvensfragmentlængde (bp)

CPPB NG1 5'GTT TGG CTG GTT GAT TCA AG 3 '633

NG2 5'GCA AGA TTT CCG ATTT GGC G 3 '

CPPB HO1 5'GCT ACG CAT ACC CGC GTT GC 3 '390

HO2 5'CGA AGA CCT TCG AGC AGA CA 3 '

rRNA Primer 1 5'-AGG CTG TTG CCA ATA TCG GC-3 '206

Primer 2 5'-ACA CTC GAG TCA CCC AGT TC-3 '

CPPB GC1 5'CTT ATC GTT TGG CTG GTT GAT TC 3 '435

GC2 5'ACC AAG ACC AAA GGT TTG ACA CTG 3 '

GC3 5'ATT TTC CAG TGT CAA AC 3 '241

GC4 5'TAT TCA AGC CCT ATC TG 3 '

(3) PCR-forstærkning

Tag 2 μl Neisseria gonorrhoeae DNA-ekstrakt, og tilsæt 28 μl af reaktionsopløsningen.Den endelige PCR-reaktionsopløsning indeholder 100 μmol / L dNTP'er, 0,5 μmol / L primere, 1 U Taq DNA-polymerase, 1,5 mmol / L Mg2 + og steril paraffinolie. 30 μl, 1000 r / min centrifugering i 30 s, PCR-amplificeringscyklus, reaktionsbetingelser: 94 ° C denaturering 1 min., Derefter 94 ° C 30s, 57 ° C 1min, 72 ° C 1min, i alt 30 cykler og til sidst 72 ° C forlængelse 5min.

Det amplificerede produkt blev elektroforeret på en 2% agarosegel i 30 minutter, farvet med ethidiumbromid, og det amplificerede DNA-fluorescerende bånd blev observeret under ultraviolet lys Størrelsen af ​​det amplificerede molekyle skulle være i overensstemmelse med størrelsen på den amplificerede målsekvens.

(4) Følsomhed og specificitet af PCR

Da CPPB også indeholder CPPB-genet på gonococcal-kromosomet, der ikke indeholder det kryptiske plasmid, vil 96% af gonococcal-bakterierne have et kryptisk plasmid. Derfor har primerne, der bruger CPPB som målsekvens, ekstremt høj følsomhed. Eksperimenter viser, at den generelle tradition Ét-trins PCR (GC1-GC2) -metode kan påvise tre Neisseria gonorrhoeae, mens enkelt-rørs indlejret PCR (GC2-GC4) kan detektere ≤0,3 Neisseria gonorrhoeae (9 CPPB-gener). Disse primere blev testet ved specificitet. Det kan amplificere DNA fra Neisseria gonorrhoeae, men producerer ikke specifikke produkter til N. gonorrhoeae.

(5) PCR-metode med enkelt rør

Baseret på den traditionelle indlejrede PCR blev to par PCR-primere specielt designet. De to ydre primere (GC1, GC2) var 25b, udglødningstemperaturen var relativt høj (68 ° C) og de indlejrede indre to primere, GC3-GC4. For 17b-udglødningstemperaturen er lavere (46 ° C), de øvrige komponenter i PCR-reaktionsopløsningen er de samme som den generelle PCR, så den ydre primer forstærkes først ved at kontrollere udglødningstemperaturen (68 ° C) efter 20-30 cykler (første gang) PCR), og reducer derefter annealingstemperaturen (46 ° C) for at få de indre primere til at bruge det første PCR-produkt som en skabelon til indlejret amplifikation, PCR's følsomhed kan nå 0,3 Neisseria gonorrhoeae.

(6) Neisseria gonorrhoeae ligasekædereaktion (LCP) detektionsmetode

På nuværende tidspunkt er metoden til PCR-påvisning af Neisseria gonorrhoeae vidt anvendt, og dens specificitet og følsomhed forbedres kontinuerligt. Samtidig anvendes en anden genetisk diagnoseteknik, ligasekædereaktion (LCP), med den høje specificitet og høje følsomhed. Ved påvisning af cocci adskiller LCP sig fra PCR, idet LCP bruger fire par primere, det anvendte enzym er ligase, ligase kan forbinde to tilstødende primere, og de to primere kan bruges som skabeloner til de to andre primere. Sidstnævnte kan ligeres under virkningen af ​​ligase og kan bruges som en skabelon til 30-40 cyklusser. Template-behandlingsmetoden, der er anvendt til LCP, er ækvivalent med fremstillingen af ​​PCR-skabelon. Proben, der anvendes til LCP, kan designes på CPPB-genet. Abbott Laboratories, der er designet til kromosomale gensekvenser, såsom opa-1-genet, designede fire LCP-prober i regionen på 48 bp i opa-1-genet, da opa-1-genet er 11 gange i gonococcal-kromosomet. Gentag derfor sættet af LCP-prober med høj følsomhed og specificitet, LCP-reaktionsproces:

Templen blev sat til LCP-reaktionsopløsningen, LCP-reaktionsopløsning: 20 mmol / L Tris-HCI pH 7,6; 100 mmol / L KCI 10 mmol / L MgCI2; 1 mmol / L EDTA; 10 mmol / L NAD +; 10 mmol / L DTT , to tilstødende prober med mærkning af hver 40fmol / L, umærket probe hver 40fmol / L, 15U varmebestandig ligase, reaktionsbetingelser: 97 ° C 1s, 55 ° C 1s, 62 ° C 50s, 40 cykler 100 ul af reaktionsproduktet blev tilsat til mikropladen på mikropladen, og farvereaktionen blev udført. Endelig blev lysværdien aflæst af en mikropladerlæser. I henhold til Buimer's eksperiment blev følsomheden af ​​LCP til påvisning af den mandlige urethrale bomuldspindeprøve 100%, og urinen blev opnået. Prøven var 88,9%, den kvindelige cervikalskeprøveprøve var 95,4%, og specificiteten af ​​LCP-metoden var så høj som 100%, hvilket var signifikant højere end PCR-specificiteten og undgik forekomsten af ​​falske positiver.

3. Forholdsregler for klinisk genetisk diagnose af Neisseria gonorrhoeae

På nuværende tidspunkt anvender den genetiske diagnosemetode til klinisk påvisning af Neisseria gonorrhoeae hovedsageligt PCR-metoden, men denne metode bør være opmærksom på flere problemer i klinisk detektion.

(1) Primer-design Ud over de gonococcal PCR-primere, der er anført ovenfor, kan det også designes fra andre gener, men

Det er primersekvensen, der skal være specifik, fordi bakteriens kromosom er stor, mange gensekvenser er ikke klare; på samme tid er der en vis homologi mellem bakterierne, og der er også homologi mellem plasmidsekvenserne indeholdt i bakterien. Derfor skal primere være designet til sammenlignende analyse af gendatabaser, og specificitet og følsomhedseksperimenter skal udføres, og primere skal vælges til klinisk påvisning.

(2) Klinisk prøvebehandling For kliniske prøver, jo renere PCR-skabelonen kræver, desto bedre skal positionen tages, når man indsamler prøver. For asymptomatiske patienter, skal der udføres passende prøveudtagning for at sikre opsamling af patogene bakterier. På grund af kompleksiteten af ​​de kliniske prøver er PCR-amplificeringen af ​​prøverne undertiden ikke ideel. Dette kan skyldes overdreven urenheder, som kræver yderligere oprensning. F.eks. Vil oprensning ved ekstraktion af phenol-chloroform forbedres. Denne oprensningsmetode er besværlig, og et kommercielt tilgængeligt DNA-oprensningskit er i øjeblikket tilgængeligt til relativt let ekstraktion af DNA med høj renhed fra kliniske prøver.

(3) Påvisningsmetode for PCR-produkter For nylig anvender klinisk PCR-påvisning af Neisseria gonorrhoeae næsten alle elektroforese til at identificere PCR-produkter Denne metode har mange problemer, såsom falske positive og falske negative resultater på grund af subjektivitet af makroskopisk observation. Hybrid kolorimetri bruges i øjeblikket i stedet for elektroforese for at forbedre specificiteten og følsomheden af ​​resultaterne.

Afslutningsvis har PCR-metoden og LCP-metoden i høj grad forbedret følsomheden og specificiteten sammenlignet med den traditionelle kulturmetode, og tiden er også stærkt forkortet. Med den kontinuerlige forbedring af gendiagnoseteknologien påvises PCR-metoden og LCP-metoden i gonococcus Vil blive en rutinemæssig detektionsmetode.

(5) Modtagelighedstest: yderligere følsomhedstest efter kulturpositiv, følsomhedstest ved papirdiffusionsmetode eller minimum inhiberende koncentration (MIC) ved agarpladefortyndingsmetode til vejledning i valget af antibiotika.

(6) PPNG-detektion : β-lactamase, ved anvendelse af kvantitativ metode til papirsyre , ved hjælp af Whatman I-filterpapir PP-NG, kan stammen gøre dens farveændring fra blå til gul, positiv for PPNG, negativ for N-PPNG.

Diagnostik af gonoré

1. Sygdomme identificeret af mænd og kvinder med gonoré

(1) Ikke-specifik urethritis: Der er ofte åbenlyse årsager til sygdommen, såsom indsættelse af kateteret, urethral-probe, genitourinary tract eller betændelse i tilstødende organer, og udskillelsesudstrygningsfarven kan detektere Gram-positive cocci.

(2) NGU: kliniske symptomer ligner gonoré, men lettere, inkubationsperioden er længere end gonoré, op til 1 til 3 uger, sekretionen er lille og serøs, dysuri er sjælden, ingen systemiske symptomer og sekretioner tages til undersøgelse. Klamydia eller mycoplasma kan ofte findes.

(3) blødt squat: skader er generelt placeret i det ydre kønsområde, forekommer i urinrøret, den scapular fossa har purulente sekretioner, urethral rødme og svær smerte, mavesår kan opdage Ducrey Haemophilus.

(4) Genital herpes: forårsaget af HSV, skaden er klyngeblister, normalt placeret i de ydre kønsorganer, perianal, lejlighedsvis i livmoderhalsen, forekommer i urinrøret, der kan være en lille mængde sekretion og urinrød prikken eller ubehag, ofte ledsaget af lokal brændende fornemmelse Smerten er indlysende og kan gentages.

(5) fast medikamentudbrud: der er en historie med medicin eller injektionsmedicin, hovedsageligt forårsaget af sulfonamider, barbiturater, salicylater eller tetracycliner, forekommer ofte i kønsslidhindens slimhindekryds, ødemer, blemmer, Erosion og udstråling osv. Med kløe eller smerter, ingen rødme og valgus i urinrøret.

(6) tuberkuløs urethritis: kan have urethrisk prikken og en lille mængde sekretioner, men ingen historie med seksuel kontakt, kan ikke finde gonokokker, kan findes tuberkulose, ledsaget af andre dele af symptomerne på tuberkulose.

2. Sygdomme identificeret ved mandlig gonoré

(1) Foreskin balanitis: almindelig ved forhud er for lang eller phimosis, hovedsageligt forårsaget af smegma-stimulering og sekundær pyogen infektion, intracapsular indre blad, glans og koronar sulcus rødme, mere snavs og purulente sekretioner , ingen urinvejssymptomer og rødme og hævelse i urinrøret, pus osv.

(2) Uringrumhed: Urinen er mælkehvid, og der er saltkrystalliseret sediment efter henstand uden ledsagende symptomer.

3. Sygdomme identificeret ved kvindelig gonoré

(1) Candida vaginitis: kløe i køns- og vaginalåbningen, mere vaginal udflod, såsom vandig eller ostemasse-lignende, vaginal slimhinde rødme, erosion, kan have en hvid film fastgjort til vaginalvæggen, tage en hvid film udtværing mikroskopisk undersøgelse synlige bakterier Silke og sporer.

(2) Trichomonas vaginitis: bevidst vaginal kløe i vagina, vaginal sekreter ofte lyserødt skum, vaginal slimhinde mere blødning, livmoderhalsen kan have jordbærlignende fremspring og punctiform blødning, vaginal sekreter Trichomonas kan påvises.

(3) Bakteriel vaginose: hovedsageligt ildfast leucorrhea, grålig hvid, ikke-suppurativ, med en "fiskeagtig" lugt, Gardner bacilli og anaerobe bakterier kan påvises fra vaginale sekretioner.

(4) unge kvindelige Staphylococcus aureus vulvitis: mere almindelig i piger i førskolen eller i skolealderen, forekommer om sommeren, vulva, perianal rødme, pustler eller purulente sekretioner, ledsaget af smerter eller kløe, sekretionsudstrygning Gram-positive coccier blev påvist.

4. Sygdomme identificeret med GPID

Der er akut blindtarmbetændelse, infektiøs abort, bækkenendometriose, ektopisk graviditet, cyst pediciel torsion eller brud på brugen.

Materialet på dette sted er beregnet til generel informativ brug og er ikke beregnet til at udgøre medicinsk rådgivning, sandsynlig diagnose eller anbefalede behandlinger.