Marcadores de superfície de linfócitos B

O teste de função imunológica humoral é um tipo de teste no qual o laboratório avalia a função imunológica humoral individual. A detecção da função imune humoral baseia-se nos processos básicos da imunidade humoral, incluindo detecção de linfócitos B, detecção de Ig e detecção de funções de produção de anticorpos. Informação básica Classificação especializada: classificação de verificação de crescimento e desenvolvimento: exame imunológico Sexo aplicável: se homens e mulheres aplicam jejum: não jejuar Dicas: Se a amostra não puder ser observada no dia, as células serão suspensas na solução de preservação do anticorpo fluorescente, armazenadas a 4 ° C e contadas no dia seguinte. Valor normal A média de IgM foi de 11,2 ± 6,0%, a média de IgG foi de 7,5 ± 3,3%. Significado clínico A diminuição do número de células B está relacionada à deficiência imunológica humoral, e o aumento no número de células B está relacionado à proliferação maligna de células B. Precauções (1) A presença de IgG aglomerada no reagente de anticorpo fluorescente e a IgG aglomerada podem ser falsamente ligadas positivamente ao receptor Fc na superfície da célula B. Portanto, para evitar a aglomeração de IgG, é necessário prestar atenção a: 1 Anticorpos fluorescentes com uma razão molar F / P excessiva não podem ser usados, e geralmente 1 a 3 são preferidos. 2 Os anticorpos fluorescentes contendo proteínas de baixa concentração são instáveis ​​a baixa temperatura e não devem ser inferiores a 2 mg / ml. 3 Os anticorpos fluorescentes armazenados a baixa temperatura não devem ser congelados e descongelados repetidamente, e centrifugados por 30 min a 150.000 r / min antes do uso para remover os agregados. (2) Quando são utilizados linfócitos vivos para coloração por imunofluorescência, adiciona-se NaN3 a todos os reagentes (anticorpo marcado, solução de Hank, etc.) para limitar a fluidez da membrana celular. Caso contrário, ocorrerá fluorescência e fagocitose semelhantes a capuzes e o número real de células fluorescentes diminuirá. (3) Quando corado com um anticorpo fluorescente anti-IgG, o complexo imune antígeno-anticorpo (tipo IgG) contido na amostra se liga ao receptor Fc na superfície da célula B e é fluorescente positivo. Por esta razão, sugeriu-se que corasse com anticorpo anti-F (ab) 2 marcado fluorescentemente para excluir os receptores Fc de serem corados. Nos últimos anos, devido ao advento de anticorpos monoclonais contra moléculas específicas da superfície de células B (CD19, CD20, etc.), tem sido utilizado anticorpos monoclonais marcados com fluoresceína contra CD19 ou CD20 para reagir diretamente com os linfócitos do sangue periférico; Os anticorpos monoclonais (anticorpos primários) de CD19 e CD20 são primeiro reagidos com linfócitos, depois combinados com coelho marcado com fluoresceína ou IgG anti-murganho de cabra (segundo anticorpo), contados por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo para contagem de sangue periférico. Linfócitos B. Processo de inspeção (1) Tome 2ml de anticoagulante de heparina, adicione uma quantidade igual de líquido de Hank e misture bem.Repita a camada na solução estratificada, 2000r / min, centrífuga por 20min. A camada de linfitos foi retirada, a soluo de Hank foi adicionada, lavada 3 vezes, 1200 rpm, centrifugada durante 10 min, a concentrao de linfitos foi ajustada para 1 x 107 / ml e 0,1 ml foi dispensado em dois tubos. (2) Lave a suspensão de linfócitos novamente com a solução de Hank, elimine o sobrenadante e use o papel de filtro para remover o líquido remanescente da parede interna do tubo e adicione 2 gotas de IgG anti-humano de coelho e IgM anti-humano (cerca de 0,08 ml). Depois de agitar suavemente, coloque a incubadora a 37 ° C por 30 min. (3) Retire da incubadora e lave duas vezes com solução de Hank, centrifugue a 1000r / min por 10min, absorva cuidadosamente todo o sobrenadante, adicione 1 gota de 50ml de glicerina tamponada com PBS no fundo do tubo, misture e tome 1 gota para adicionar No slide, cubra a lamela e observe sob um microscópio de fluorescência. Não é adequado para a multidão Não há tabus. Reações adversas e riscos Sem complicações ou perigos.

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