chylomikrony

Chylomikrony są największymi cząsteczkami lipoprotein w ludzkim osoczu, a CM stanowi większość dietetycznego TG dostarczanego z miejsca wchłaniania z jelita cienkiego do krążenia ogólnoustrojowego. Szybkość usuwania CM jest szybka, okres półtrwania wynosi 10 min, a normalny człowiek nie może jej wykryć po 12 godzinach na czczo. Kiedy lipoproteina jest elektroforezowana, CM jest u źródła. Należy zauważyć, że próbka powinna być świeża podczas elektroforezy lipoprotein w surowicy i nie powinna być przechowywana zamrożona. Podstawowe informacje Klasyfikacja specjalistyczna: Klasyfikacja badania trawienia: badanie krwi Obowiązująca płeć: czy mężczyźni i kobiety stosują post: post Wyniki analizy: Poniżej normy: Wartość normalna: Nie Powyżej normalnego: Negatywne: Normalne Pozytywne: Hiperlipoproteinemia typu I, hiperlipoproteinemia typu V. Wskazówki: Przed badaniem dieta jest lekka, a alkohol jest zabroniony. Wartość normalna Negatywne Znaczenie kliniczne Pozytywna hiperlipoproteinemia typu I, hiperlipoproteinemia typu V. Pozytywnymi wynikami mogą być choroby: środki ostrożności dotyczące hiperlipoproteinemii typu I, hiperlipoproteinemii typu V. 1. Metoda mętności immunoturbidymetrycznej: (1) W odniesieniu do surowicy odpornościowej: Test turbidymetryczny ma wyższe wymagania w stosunku do surowicy odpornościowej niż w przypadku innych metod. Metoda turbidymetryczna jest korzystnie przeciwciałem poliklonalnym. Anty-surowica musi być wolna od anty-surowicy. Należy zwrócić szczególną uwagę na apoA-I ekstrahowane z ludzkiej surowicy, aby osiągnąć immunopurity, czystość chromatograficzną i elektroforezę, co nie jest możliwe w ogólnym laboratorium. Miano surowicy odpornościowej (miano) nie powinno być mniejsze niż 16. Obecnie w niektórych krajowych odczynnikach komercyjnych surowica apoA-I ma bardzo niskie miano, dlatego należy zachować ostrożność przy zakupie zestawu. Jeśli nie masz doświadczenia w określaniu jakości surowic odpornościowych przed zakupem, poproś wykwalifikowaną jednostkę o jej zidentyfikowanie. (2) Próbkę w górnej metodzie (surowica) rozcieńcza się 200 razy w przypadku operacji ręcznej (100 μl próbki), a jeśli jest to precyzyjny próbnik, można ją rozcieńczyć 20 razy (przy użyciu 10 μl). Aby dostosować się do warunków różnych laboratoriów (takich jak różne typy zautomatyzowanych instrumentów), należy zwrócić uwagę na proporcję antygenu-przeciwciała przy dokonywaniu odpowiednich modyfikacji.Należy zauważyć, że w układzie reakcyjnym nie powinno być nadmiaru antygenu, a liniowa górna granica nie powinna być niższa niż 2,5 g / l. Innymi słowy, ilość surowicy odpornościowej musi być wystarczająca, w przeciwnym razie wyniki są niskie, gdy apoA-I jest wysoka w próbce. Obecnie niektóre domowe zestawy leków mają nie tylko niskie miano przeciw surowicy, ale dawka próbek w operacji jest zbyt duża (np. 3 ~ 5 μl), przeciwciało jest oczywiście niewystarczające, a wyniki pomiaru są nieuchronnie niedokładne. (3) W celu uzyskania dokładnego pomiaru wyniki obliczeń krzywej kalibracji należy wykonać w pomiarze turbidymetrycznym apoA-I i B (metoda punktu końcowego). Pewne stężenie (niskie dawkowanie próbki) (X) jest zasadniczo liniowe z mętnością (Y), a regresja liniowa oblicza pewien punkt przecięcia na osi Y (wartość A <0,1), więc odchylenie wyniku obliczenia jest obliczane przez kalibrację jednopunktową. Większe, zmierzone wyniki nie mogą dokładnie odzwierciedlać poziomu wysokiego (wysoki niski, niski wysoki). Nie zaniedbuj dokładności pomiaru ze względu na prostotę metody jednopunktowej. Niezależnie od rodzaju zautomatyzowanego przyrządu, musisz najpierw wypróbować krzywą kalibracji. Jeżeli test powtarza się w warunkach instrumentu i w określonych warunkach, przecięcie linii regresji nie jest oczywiste, wówczas można zastosować metodę kalibracji jednopunktowej. Gdy ilość próbki wynosi od 3 do 5 μl, nawet jeśli ilość surowicy odpornościowej jest zwiększona, stężenie i zmętnienie nie są liniowe i można je obliczyć dopiero po przekształceniu krzywej liniowo. (4) Głównym czynnikiem zakłócającym jest zmętnienie samej surowicy (takiej jak surowica wysokotłuszczowa), a metody obróbki wstępnej, takie jak ultrawirowanie lub hydroliza lipazy, nie są praktyczne. Wpływ zmętnienia środkami powierzchniowo czynnymi jest również ograniczony, dlatego w teście należy wykonać ślepą probówkę. Oprócz dwupunktowej metody stosowanej w automatycznej analizie błędem jest ręczne użycie pojedynczego odczynnika bez odejmowania próbki ślepej. Aby zmniejszyć wpływ efektów matrycy na odpowiedź mętności, jako kalibrator należy użyć surowicy o stałej wartości. Ponadto należy wykluczyć zakłócenia, takie jak cząsteczki kurzu i mętne rysy naczynia. (5) Niektóre zestawy komercyjne (w tym niektóre produkty importowane) mają niedokładne wartości surowicy kalibracyjnej, które są ważnym źródłem błędów. 2. Elektroforeza rakietowa: (1) Wybór współczynnika rozcieńczenia antygenu i ilości surowicy odpornościowej powinien być wyraźny, nachylenie krzywej kalibracji jest umiarkowane, a krzywa wyrównania jest odpowiednia. Metoda równocześnie mierzy apoA-I i apoB, a ilość dwóch surowic odpornościowych należy dostosować tak, aby wysokość pików dwóch była różna, a wysokość piku apoB była nie mniejsza niż 1 cm. (2) Surowice odpornościowe z różnych rodzajów źródeł (takich jak króliki i owce), testowane po równorzędnej cenie, wyniki będą różne. Test apoA-I jest korzystnie króliczą surowicą odpornościową. Gdy stosuje się surowicę królika, kształt piku jest ostry, a pik wytwarzany przez surowicę owczą jest gruby, wierzchołek piku jest okrągły i tępy, a czasami przed szczytem pojawia się obraz ducha. Nachylenie krzywej kalibracyjnej dla surowicy kalibracyjnej jest również inne. Jednak bez względu na zastosowaną surowicę wyniki ilościowe nie różnią się zbytnio. (3) Elektroforeza w pewnych warunkach, wysokość piku surowicy kalibracyjnej dla różnych rozcieńczeń nie zmieni się znacząco, a nachylenie krzywej kalibracji jest zasadniczo takie samo. Jeżeli wysokość piku próbki przekracza zakres krzywej kalibracji, współczynnik rozcieńczenia próbki należy wyregulować i ponownie przetestować. CV międzypokładowe wynosi zwykle mniej niż 5%. (4) Wyniki elektroforezy rakietowej można zobaczyć przez barwienie lub bezpośrednią wizualną obserwację piku rakiety. Ten pierwszy wykorzystuje mniej próbek i oszczędza surowicę odpornościową, ale jeśli próbki i surowica odpornościowa zostaną odpowiednio zwiększone, wygodniej jest nie plamić. Zastosowana agaroza powinna być standardowa elektroosmotyczna lub hipotoniczna, a dodanie odpowiedniej ilości dekstranu lub glikolu polietylenowego do żelu sprawi, że szczyt rakiety będzie wyraźniejszy. (5) Pomiar piku rakiety może obliczyć wysokość obszaru lub wysokości piku, a obszarem jest wysokość piku pomnożona przez szerokość piku (szerokość w połowie wysokości piku). Dokładność pomiaru wynosi korzystnie do 0,1 mm. Należy stosować mechaniczne lub elektroniczne urządzenia wzmacniające. Wysokość piku w zakresie krzywej standardowej wynosi korzystnie od 1 do 4 cm. (6) Niniejsza ustawa ma zastosowanie do analizy niewielkiej liczby okazów. Nadaje się również do oznaczania apoAII, CI, CII, CIII, D, E i Lp (a). Proces kontroli 1. Metoda mętności immunoturbidymetrycznej: (1) Próbka powinna być szybko oddzielającą się surowicą, którą można oddzielić w czasie. Można ją przechowywać w lodówce w temperaturze 2–6 ° C, mierzonej w ciągu 1 tygodnia, i przechowywać w temperaturze –20 ° C przez pół roku. (2) W przypadku korzystania z w pełni automatycznego analizatora stosunek antygenu do przeciwciała i czas reakcji należy rozsądnie dobrać zgodnie z różnymi parametrami konstrukcyjnymi przyrządu. Może być również stosowany jako nefelometria rozpraszania prędkości CM, taka jak mętnościomierz Beckman ICS lub układ matrycowy). (3) Przyrządy stosowane w metodzie ręcznej: precyzyjny fotometr z filtrem 340 nm (lub rozdzielaczem), objętość próbki wynosi korzystnie 0,5 ml (w celu zaoszczędzenia surowicy), najlepiej z kubkiem przepływowym, najlepiej rozcieńczać próbkę Poprawiony sampler. (4) Obróbka próbki: Próbkę surowicy i surowicę kontrolną rozcieńcza się 1: 200 rozcieńczalnikiem próbki, to znaczy najpierw rozcieńcza 1:20 (5,0 μl surowicy + 95 μl rozcieńczalnika), a następnie rozcieńcza 1:10 ( Nadmiar surowicy 1:20 do oznaczenia apoB). Po zmieszaniu pozostawiono w 25 do 37 ° C na 30 minut i zmętniono przy długości fali 340 nm Wynik odczytano na krzywej standardowej zgodnie z wartością A U-UB. Ta metoda ma CV <5%. (5) Krzywa kalibracyjna: Dla każdej partii operacji ręcznej i półautomatycznej wymagana jest krzywa kalibracyjna, a surowicę kalibracyjną można rozcieńczyć do czterech stężeń 1: 100, 1: 200, 1: 300 i 1: 400, które są takie same jak w próbce. Operacja, oblicz stężenie CM każdej standardowej probówki zgodnie ze stałą wartością i wykreśl stężenie (X) z odpowiednią wartością A (Y) (obliczoną metodą regresji liniowej), która jest zasadniczo prosta, ale ma pewne przecięcie na osi Y. Więc nie możesz użyć standardu jednego punktu. Gdy operacja jest dokładna, współczynnik korelacji między stężeniem a wartością A powinien przekraczać 0,985. Jeśli istnieją trzy surowice kalibracyjne o wysokim, średnim i niskim stężeniu, można je obsługiwać w taki sam sposób, jak próbkę, i można je stosować do kalibracji trzypunktowej. Można również stosować do kalibracji pięciopunktowej (tj. Mieszanie surowicy o wysokim średnim stężeniu, średnie i niskie Stężenia surowicy zmieszano w równych ilościach, aby uzyskać pozostałe dwie surowice kalibracyjne). Zakres liniowy tej metody: 0,4 ~ 2,5 g / l. 2. Elektroforeza rakietowa: (1) płytka do nalewania: 10 g / l agarozy 10 ml na płytkę, stopić we wrzącej łaźni wodnej, dobrze wymieszać, dodać 50 μl surowicy CM i surowicy apoB 8 μl, gdy jest zimno do 50 ~ 55 ° C (ilość zależy od miana surowicy odpornościowej) ), szybko wymieszaj i zalej szklaną płytkę ustawioną wstępnie na platformie wodnej, ochłodź, a następnie umieść w 4 ° C, po 20 minutach wybij otwory, otwór znajduje się na końcu katody płyty, średnica otworu wynosi 3 mm, odstęp otworów wynosi co najmniej 5 mm, a pojemność otworu wynosi 5 μl. Umieścić płytkę w zbiorniku do elektroforezy i przełożyć bibułą filtracyjną. (2) Rozcieńczenie antygenu: Surowicę kalibracyjną rozcieńczono do 1: 100, 1: 150, 1: 200, 1: 300 i 1: 400 (dla krzywej kalibracji) 0,15 mol / L roztworem NaCl, a próbka surowicy wynosiła 1: Rozcieńczony w 200 ° C, umieść lodówkę w 4 ° C na nie więcej niż 3 dni. (3) Obciążenie: 5 μl (dokładna) rozcieńczonej surowicy i próbek pobrano w stanie niskiego prądu (10 mA / płytkę) i dodano do dołka próbki żelu agarozowego. Każda tablica musi spełniać szereg norm. (4) Włączenie: stały przepływ 24 mA / płytkę, napięcie na zaciskach 6 ~ 8 V / cm, chłodzenie bieżącą wodą w celu utrzymania agarozy 15 ° C, elektroforeza 3 ~ 4h. (5) Deproteinizacja i film suchy: Płytkę agarozową po elektroforezie zanurzono w 0,15 mol / l NaCl na 30 minut, a film umieszczono na filmie poliestrowym i wysuszono pod lekkim ciśnieniem w wielowarstwowej bibule filtracyjnej. Wilgoć w kleju jest następnie naturalnie suszona za pomocą bibuły filtracyjnej, folii i folii poliestrowej lub suszona dmuchawą gorącego powietrza Po wysuszeniu folia jest naturalnie oddzielana od bibuły filtracyjnej i folii poliestrowej. (6) Barwienie: Film agarozowy zanurzono w roztworze barwiącym na 20 do 30 minut. (7) Odbarwianie: Namocz zabarwioną folię roztworem odbarwiającym, aż szczyt rakiety będzie czysty, a tło będzie zasadniczo bezbarwne. Może być zaciśnięty w dwóch kawałkach celofanu w wodzie i może być przechowywany przez długi czas po wyschnięciu. Można go również namoczyć pod bieżącą wodą, aby usunąć tło. Uwaga: 1 Stosunek rozcieńczenia antygenu i ilość surowicy odpornościowej należy dobrać tak, aby pik rakiety był wyraźny, nachylenie krzywej kalibracji było umiarkowane, a linia była odpowiednia. Metoda równocześnie mierzy apoA-I i apoB, a ilość dwóch surowic odpornościowych należy dostosować tak, aby wysokość pików dwóch była różna, a wysokość piku apoB była nie mniejsza niż 1 cm. 2 Różne rodzaje surowicy odpornościowej (takie jak króliki i owce) są testowane po równorzędnej cenie, a wyniki będą różne. Test apoA-I jest korzystnie króliczą surowicą odpornościową. Gdy stosuje się surowicę królika, kształt piku jest ostry, a pik wytwarzany przez surowicę owczą jest gruby, wierzchołek piku jest okrągły i tępy, a czasami przed szczytem pojawia się obraz ducha. Nachylenie krzywej kalibracyjnej dla surowicy kalibracyjnej jest również inne. Jednak bez względu na zastosowaną surowicę wyniki ilościowe nie różnią się zbytnio. 3 Elektroforeza w pewnych warunkach, wysokość piku surowicy kalibracyjnej dla różnych rozcieńczeń nie zmieni się znacząco, a nachylenie krzywej kalibracji jest zasadniczo takie samo. Jeżeli wysokość piku próbki przekracza zakres krzywej kalibracji, współczynnik rozcieńczenia próbki należy wyregulować i ponownie przetestować. CV międzypokładowe wynosi zwykle mniej niż 5%. 4 Wyniki elektroforezy rakietowej można zaobserwować przez barwienie lub bezpośrednią wizualną obserwację piku rakiety. Ten pierwszy wykorzystuje mniej próbek i oszczędza surowicę odpornościową, ale jeśli próbki i surowica odpornościowa zostaną odpowiednio zwiększone, wygodniej jest nie plamić. Zastosowana agaroza powinna być standardowa elektroosmotyczna lub hipotoniczna, a dodanie odpowiedniej ilości dekstranu lub glikolu polietylenowego do żelu sprawi, że szczyt rakiety będzie wyraźniejszy. 5 Pomiar piku rakiety może obliczyć powierzchnię lub wysokość piku, a obszarem jest wysokość piku pomnożona przez szerokość piku (szerokość w połowie wysokości piku). Dokładność pomiaru wynosi korzystnie do 0,1 mm. Należy stosować mechaniczne lub elektroniczne urządzenia wzmacniające. Wysokość piku w zakresie krzywej standardowej wynosi korzystnie od 1 do 4 cm. 6 Ta metoda ma zastosowanie do analizy niewielkiej ilości próbek. Nadaje się również do oznaczania apoAII, CI, CII, CIII, D, E i Lp (a). Nie nadaje się dla tłumu Nie Działania niepożądane i ryzyko Nie

Materiały na tej stronie mają na celu ogólne wykorzystanie informacyjne i nie stanowią porady medycznej, prawdopodobnej diagnozy ani zalecanych metod leczenia.