Isolatie en identificatie van anaërobe bacteriën

De isolatie en identificatie van anaërobe bacteriën is een test voor de scheiding en identificatie van bacteriën met een hoge zuurstofgevoeligheid Omdat anaërobe micro-organismen in de natuur wijdverspreid zijn en een grote verscheidenheid hebben, hebben hun fysiologische functies steeds meer aandacht gekregen. Verplichte anaërobe bacteriën zijn zeer gevoelig voor zuurstof, daarom is de sleutel tot hun scheiding, cultuur en levensvatbare telling het verschaffen van een cultuuromgeving vrij van zuurstof en een laag redoxpotentiaal. Basis informatie Specialistenclassificatie: classificatie voor groei en ontwikkeling controleren: biochemisch onderzoek Toepasselijk geslacht: of mannen en vrouwen nuchter zijn: vasten Tips: Als de kolonie te klein is, gebruik dan een vergrootglas om de kolonies te observeren. Normale waarde Het type en de proportie van de flora in het lichaam zijn normaal en het menselijk lichaam bevindt zich in een staat van dynamisch evenwicht en gezondheid. Klinische betekenis Hengate anaërobe rollende buistechnologie, Hengate anaërobe rollende buistechnologie is een anaërobe kweektechnologie die voor het eerst werd voorgesteld door de Amerikaanse microbioloog Hengate in 1950 en toegepast op anaëroob micro-organismeonderzoek in de pens. Abnormale resultaten: speciale ziekten veroorzaakt door Clostridium-anaërobe middelen zoals gasgangreen, tetanus, botulisme, enz. Mensen die onderzocht moeten worden: patiënten met diabetes, ernstige leverziekte, cirrose, uremie, aambeien, ledematen gangreen, botulisme en andere symptomen. voorzorgsmaatregelen Bij het proces van scheiding en identificatie van anaërobe bacteriën moeten de volgende zaken worden opgemerkt: (1) Anaërobe monsters moeten tijdens het verzamelen en transport uit de lucht worden geïsoleerd en moeten binnen 30 minuten worden voltooid, waarbij verontreiniging van de normale flora wordt vermeden. (2) Het medium moet vers worden bereid. Als het te lang wordt bewaard, lost zuurstof op het oppervlak op of bevindt zich peroxide in het medium, wat niet bevorderlijk is voor de groei van anaërobe bacteriën. (3) Als de kolonie te klein is, moet de kolonie met een vergrootglas worden geobserveerd. (4) Om een zuurstoftolerantietest uit te voeren, is het vereist om 4 tot 5 kolonies met verschillende eigenschappen uit elke agarplaat te plukken, aërobe en anaërobe bloed-agarplaten te inoculeren en deze in aerobe, kooldioxide- en anaërobe omgevingen te plaatsen. (5) Als u extracellulaire enzymidentificatie uitvoert, moet u voldoende bacteriële concentratie hebben. Inspectie proces apart (1) nummer Neem vijf steriele waterbuizen en markeer ze met een marker om 10-1, 10-2, ... 10-5 aan te geven. (2) verdunning Gebruik een steriele spuit in een niet-zuurstof-steriel, ultra-schoon anaëroob handschoenenkastje om 1 ml van een goed gemengd vloeibaar monster op te nemen, voeg dit toe aan een anaërobe reageerbuis met vooraf gereduceerde fysiologische zoutoplossing en meng het gelijkmatig met een oscillator. Maak een 10-1 verdunning. Een 1 ml 10-1 verdunning werd gepipetteerd in een afzonderlijke anaërobe buis die 9 ml fysiologische zoutoplossing bevatte met behulp van een steriele spuit om een 10-2 verdunning te maken. Serieel 10 maal verdund tot 10-6 om verschillende monsterverdunningen te maken. Het aantal buizen wordt meestal gekozen uit drie verdunningen van 10-4, 10-5 en 10-6. (3) Rolscheiding 1) Rollende buis Het anaërobe steriele agarmedium werd opgelost in een kokend waterbad, geplaatst in een waterbad bij een constante temperatuur van 46-50 ° C en gebruikt, en toen het medium uit de fles werd genomen, werd het opgeblazen met N2 in het medium. Blaas vervolgens op met N2 in de reageerbuis, verwijder alle lucht in de buis, voeg vervolgens het medium toe aan de buis en stop onmiddellijk de stop. Wanneer de stop in de buis wordt gestoken, wordt de opblaasnaald op tijd uitgetrokken. Pipetteer 0,1 ml van elk van de 10-4, 10-5 en 10-6 verdunningen in een te gebruiken reageerbuis en plaats deze vervolgens plat op een porseleinen plaat met ijswater en rol snel. De oplosbaar gemaakte agar vormt een gestolde laag onmiddellijk op de binnenwand van de reageerbuis. 2) Scheiding en zuivering De resulterende kolonies moeten worden geplukt en onderzocht op hun morfologie en zuiverheid. Als er geen zuivere cultuur is verkregen, verdun de buis dan opnieuw en pluk de dikke darm opnieuw totdat een zuivere cultuur is verkregen. De te plukken afzonderlijke kolonies worden vooraf onder een vergrootglas waargenomen en gemarkeerd. De medium reageerbuis wordt vervolgens bevestigd aan een geschikte houder en de rubberen stop van de reageerbuis wordt geopend en een met gas gevulde stikstofnaald met een juiste luchtstroom en een vlam gedode bacterie wordt snel in de buis ingebracht. Tegelijkertijd wordt een andere vloeibare anaërobe buis uit de rubberen plug verwijderd en in een andere gesteriliseerde ontluchtingsnaald geplaatst. Steek de voorbereide elleboogcapillairen voorzichtig in het vaste medium, identificeer de te plukken kolonies, zuig ze voorzichtig op, breng ze over in een vloeibare reageerbuis en stop. De kweek werd 24 uur of langer bij 37 ° C gekweekt of nadat de troebelheid van de kweekoplossing was gecontroleerd en de zuiverheid van de geïsoleerde kweek werd onderzocht. 3) Dash scheiding Een uiteinde van de rubberen stop van de reageerbuis wordt op de vlam gebrand en de gaszuignaald wordt gebruikt om het mondstuk af te sluiten.Voordat de naald snel wordt verwijderd, wordt de lucht 15-20 s geventileerd en wordt een uiteinde van de buis een tijdje op de vlam gebrand. Draai de pijpplug vast en de opgerolde pijp wordt opgericht en geïsoleerd Gebruik CO2: H2 = 80: 20. Omdat CO2 zwaarder is dan lucht, zal de pijpplug geen luchtresten bevatten na opening. De schrijfbuis kan op 34-37 graden worden gekweekt om kolonies te laten groeien. Identificatie van stammen 1 suikerfermentatietest Suikerfermentatie-experimenten zijn de meest gebruikte biochemische reacties en zijn vooral belangrijk bij de identificatie van darmbacteriën. De meeste bacteriën kunnen suiker als koolstofbron en energiebron gebruiken, maar ze hebben grote verschillen in hun vermogen om suiker af te breken. Sommige bacteriën kunnen suiker afbreken en zuur produceren (zoals melkzuur, azijnzuur, propionzuur, enz.) En gas (zoals Waterstof, methaan, kooldioxide, enz .; sommige bacteriën produceren alleen zuur en produceren geen gas. Escherichia coli kan bijvoorbeeld lactose en glucose ontleden om zuur te produceren en gas te produceren; Salmonella typhimurium kan glucose ontleden om zuur te produceren en geen gas te produceren, en kan lactose niet ontleden; gemeenschappelijke Proteus ontleedt glucose om zuur te produceren en produceert gas, dat lactose niet kan ontleden. De productie van zuur kan worden bepaald met behulp van een indicator. Bromocresol paars [pH 5,2 (geel) - 6,8 (paars)] werd vooraf toegevoegd toen het medium werd bereid, en toen het zuur werd geproduceerd door fermentatie, werd het medium veranderd van paars naar geel. Het genereren van gas kan worden aangetoond door de aanwezigheid of afwezigheid van bellen in de omgekeerde Dehan-buis in de fermentatiebuis. Specifieke experimentele stappen: 1 De bacterievloeistof wordt op geschikte wijze verdund en vervolgens wordt in een steriele omgeving een bepaalde hoeveelheid van de verdunde oplossing in de biochemische identificatiebuis geïnjecteerd en afgesloten met een steriele afdichtfilm. 2 Plaats de geïnoculeerde identificatiebuis in een anaërobe tank en plaats deze in een 37 ° C constante temperatuur incubator met voldoende stikstof. De kleurverandering en gasproductie van elke buis werden na 324 uur waargenomen. 2 eiwitontledingsexperiment 1 De bacterievloeistof wordt op geschikte wijze verdund en vervolgens wordt in een steriele omgeving een bepaalde hoeveelheid van de verdunde oplossing in de biochemische identificatiebuis geïnjecteerd en afgesloten met een steriele afdichtfilm. 2 Plaats de geïnoculeerde identificatiebuis in een anaërobe tank en plaats deze in een 37 ° C constante temperatuur incubator met voldoende stikstof. Na 324 uur werden de buizen onderworpen aan respectievelijk de Mirren-reactie, de hydrazinereactie, de gele reactie en de mondwaterreactie. 3 zetmeelhydrolyse-experiment 1 De bacterievloeistof wordt op geschikte wijze verdund en vervolgens wordt in een steriele omgeving een bepaalde hoeveelheid van de verdunde oplossing in de biochemische identificatiebuis geïnjecteerd en afgesloten met een steriele afdichtfilm. 2 Plaats de geïnoculeerde identificatiebuis in een anaërobe tank en plaats deze in een 37 ° C constante temperatuur incubator met voldoende stikstof. Na 324 uur werd een geschikte hoeveelheid jodiumoplossing van Lugol aan elke buis toegevoegd om de hydrolyse van het zetmeel te observeren. Niet geschikt voor het publiek Geen relevante informatie. Bijwerkingen en risico's Er zijn geen gerelateerde complicaties en gevaren gevonden.

Het materiaal op deze site is bedoeld voor algemeen informatief gebruik en is niet bedoeld als medisch advies, waarschijnlijke diagnose of aanbevolen behandelingen.