혼합 림프구 배양 분석

혼합 림프구 배양 (MLC)은 수용체와 공여자의 주요 조직 적합성 항원 (HLA 항원) 사이의 상용 성 정도를 결정하기위한 시험 방법이며, 장기 이식 전에 조직 매칭에 일반적으로 사용된다. 혼합 림프구 배양은 공여자 및 수용자 림프구의 양방향 혼합 배양, 또는 공여 림프구의 혼합 배양에 대한 불 활성화이며, 세포 반응의 정도는 공여자-수용체 호환성의 정도와 음의 상관 관계가있다. 기본 정보 전문가 분류 : 성장 및 발달 확인 분류 : 면역 학적 검사 해당 성별 : 남성과 여성의 금식 적용 여부 : 금식 팁 : 거부율이 높은 사람은이 검사를 수행하지 않아야합니다. 정상 값 형태 학적 카운팅 방법 전환율은 <10 %이다. 동위 원소 계수 방법은 cpm을 비교하여 P> 0.05를 얻는다. 임상 적 의의 비정상 결과 : 신장 이식에서 살아있는 공여자의 전환율은 <10 %이어야하고 사체 공여자의 전환율은> 10 %이어야한다. 반응이 적은 매칭은 동일한 실험 배치에서만 사용할 수 있습니다. 10 %의 림프구 전환율은 다른 신체의 조직간에 호환됩니다. 림프구 혼합 배양 검사는 환자의 면역 상태를 감지하는 데 사용됩니다. T 림프구의 수가 감소하면, 전환율도 낮아진다. 적절한 기증자를 선택하기 위해 장기 및 골수 이식을위한 매칭 방법으로 사용될 수 있습니다. 전환율이 높으면받는 사람과받는 사람의 차이에 사용됩니다. 전환율이 낮고 이식 후 성공률이 높습니다. 사람들을 감지해야합니다. 면역력이 약하거나없는 사람들. 주의 사항 검사시 :이 시험은 장기 이식을위한 공여자 선별 방법으로 사용될 수 있으며, 전환율이 낮은 사람은 성공률이 높고 전환율이 높은 사람은 성공률이 낮다. 검사 과정 1. 공여자 림프구의 준비 : 신선한 말초 정맥혈을 1 : 1의 비율로 1.077의 비중을 갖는 림프구 분리 용액을 함유 한 원심 분리 튜브에 첨가하고, 액체 표면에 부드럽게 적용 하였다 .2000 r / 분에서 20 분 동안 원심 분리하여 중간 후광 림프구 층을 흡수 하였다. 두 번 씻으십시오. 파란색 염색, 플레이트 수를 세어 세포 밀도를 2 × 109 / L로 조정하고, 3 개의 튜브로 나누고, 별도로 원심 분리하고, 침전물을 남겨두고 각 튜브에 미토 마이신 250 μL를 첨가하십시오 (최종 농도 50 mg / L) 생리 식염수 1.75mL, 37 ° C에서 40 분간 수욕, 생리 식염수로 2 회 세척 한 후 100mL / L의 소 태아 혈청을 포함한 RPMI1640 용액으로 세포 밀도를 1 × 10 10 / L로 조정하고 항체를 첨가하여 항원을 차단합니다. 2. 수용체 림프구의 제조 : 신선한 말초 정맥혈을 1 : 1의 비율로 1.077의 비중을 갖는 림프구 분리 용액을 함유 한 원심 분리 튜브에 첨가하고, 액체 표면에 부드럽게 적용 하였다 .2000 r / 분에서 20 분 동안 원심 분리하여 중간 후광 림프구 층을 흡수 하였다. 120mL / L 태아 소 혈청을 포함하는 RPMI1640 배지를 사용하여 세포 밀도를 1x1010 / L로 조정합니다. 3. 혼합 림프구 배양 : 제조 된 R 및 D를 다음과 같이 96- 웰 플레이트에 첨가하고, 37 ° C에서 24 시간 동안 50 mL / L CO2 배양기에서 배양 하였다. 그룹 A : R50 μL + D 50 μL; 그룹 B : R50 μL + D50 μL + IL 2 정제 및 mAb 15 μL의 중화 그룹 C : R50μL + ILβ2 정제 및 중화 된 mAb 15μL; 그룹 D : R50μL. 각 그룹은 3 개의 중복 웰을 가지며, 블랭크 대조군은 100μL의 RPMI1640 배지였다. 군중에게 적합하지 않음 사람에게 적합하지 않음 : 거부율이 높은 사람. 부작용 및 위험 관련된 합병증과 위험은 없습니다.

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