B 림프구 표면 마커

체액 성 면역 기능 검사는 실험실에서 개별 체액 성 면역 기능을 평가하는 테스트 유형입니다. 체액 성 면역 기능의 검출은 B 림프구 검출, Ig 검출 및 항체 생산 기능의 검출을 포함한 체액 면역의 기본 과정에 기초한다. 기본 정보 전문가 분류 : 성장 및 발달 확인 분류 : 면역 학적 검사 해당 성별 : 남성과 여성의 금식 적용 여부 : 금식 팁 : 당일 표본을 관찰 할 수없는 경우, 세포를 형광 항체 보존 용액에 현탁시키고 4 ° C에 보관하고 다음날 계수합니다. 정상 값 평균 IgM은 11.2 ± 6.0 % 였고 평균 IgG는 7.5 ± 3.3 %였다. 임상 적 의의 B 세포의 수의 감소는 체액 성 면역 결핍과 관련이 있고, B 세포의 수의 증가는 B 세포의 악성 증식과 관련이 있습니다. 주의 사항 (1) 형광 항체 시약에 응집 된 IgG가 존재하고 응집 된 IgG가 B 세포 표면의 Fc 수용체에 가양 성으로 결합 될 수 있으므로, IgG의 응집을 피하기 위해 다음 사항에주의 할 필요가있다. 1 과잉의 F / P 몰비를 갖는 형광 항체는 사용될 수 없으며, 일반적으로 1 내지 3이 바람직하다. 2 저농도 단백질을 함유 한 형광 항체는 저온에서 불안정하며 2 mg / ml 이상이어야합니다. 3 저온에서 저장된 형광 항체는 반복적으로 동결-해동되어서는 안되며 응집체 제거에 사용하기 전에 150,000 r / min에서 30 분 동안 원심 분리되어서는 안됩니다. (2) 살아있는 림프구가 면역 형광 염색에 사용될 때, NaN3은 모든 시약 (표지 된 항체, 행크 용액 등)에 첨가되어 세포막의 유동성을 제한합니다. 그렇지 않으면, 캡형 형광 및 포식 작용이 일어나고, 실제 형광 세포 수가 감소 할 것이다. (3) 항 -IgG 형광 항체로 염색 될 때, 샘플에 함유 된 항원-항체 (IgG 유형) 면역 복합체는 B 세포 표면의 Fc 수용체에 결합하고 형광 양성이다. 이러한 이유로, Fc 수용체가 염색되는 것을 배제하기 위해 형광 표지 된 항 -F (ab) 2 항체로 염색하는 것이 제안되었다. 최근에, B 세포 표면 특이 적 분자 (CD19, CD20 등)에 대한 모노클로 날 항체의 출현으로 말초 혈액 림프구와 직접 반응하기 위해 CD19 또는 CD20에 대한 플루오 레세 인-표지 모노클로 날 항체를 사용하는 경향이있다; CD19 및 CD20의 모노클로 날 항체 (1 차 항체)는 먼저 림프구와 반응 한 다음, 형광 현미경 또는 유세포 분석법에 의해 계수 된 말초 혈액을 계수하여 플루오 레세 인-표지 된 토끼 또는 염소 항-마우스 IgG (제 2 항체)와 조합된다. B 림프구. 검사 과정 (1) 헤파린 항응고제 2ml를 취하고 같은 양의 행크 액을 넣고 잘 섞은 후 층상 용액 2000r / min에서 20 분간 원심 분리를 반복한다. 림프구 층을 꺼내고, 행크 용액을 첨가하고, 3 회 세척하고, 1200 r / 분으로 세척하고, 10 분 동안 원심 분리하고, 림프구 농도를 1 x 107 / ml로 조정하고, 0.1 ml를 2 개의 튜브에 분배 하였다. (2) 행크 용액으로 림프구 현탁액을 다시 한번 세척하고, 상청액을 버리고, 여과지를 사용하여 튜브의 내벽에서 남아있는 액체를 제거하고, 토끼 항-인간 IgG 및 항-인간 IgM 형광 항체 (약 0.08 ml) 2 방울을 첨가하십시오. 부드럽게 흔든 후 37 ° C 배양기를 30 분 동안 두십시오. (3) 인큐베이터에서 꺼내 행크 용액으로 두 번 씻고, 1000r / min에서 10 분간 원심 분리하고, 조심스럽게 모든 상청액을 흡수하고, 튜브 바닥에 50ml PBS 완충 글리세린 1 방울을 첨가하고, 혼합하고 1 방울 추가 슬라이드에서 coverslip을 덮고 형광 현미경으로 관찰하십시오. 군중에게 적합하지 않음 금기는 없습니다. 부작용 및 위험 합병증이나 위험이 없습니다.

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