헤모글로빈 전기영동

다양한 헤모글로빈의 상이한 등전점은 특정 pH 완충제에서 상이한 양전하 및 음전하를 가지며, 전기 영동 후 헤모글로빈은 상이한 방향으로 이동한다. 기본 정보 전문가 분류 : 성장 및 발달 시험 분류 : 혈액 검사 해당 성별 : 남성과 여성의 금식 적용 여부 : 금식 팁 : 검사 전에식이 요법이 가볍고 알코올 섭취가 금지되어 있습니다. 정상 값 전기 영동법은 HbA 95 %, HbA 21.1 % 내지 3.2 %, 및 HbA 32 % 내지 3 %였다. 가수 방법의 HbF는 <4 %입니다. 임상 적 의의 1, 주요 성분은 HbS이며, HbB는 겸상 적혈구 헤모글로빈 질환에서 볼 수 있습니다. 2, HbS, HbF 및 HbA2는 약간 증가한 반면, HbA는 드물거나 사라졌으며, 조사와 결합하여 지중해에서 더 흔한 HbS-β- 마린 빈혈로 진단 될 수 있습니다. 도 3에서, 10 % -30 % HbA 및 약간 증가 된 HbF 및 HbA2를 함유하는 HbS에 더하여, HbS-β- 해병 빈혈이 또한 고려 될 수있다. 4. HbS는 20 % -30 %, HbA는 65 % -75 %를 차지하고, HbS-α- 해병 빈혈로 진단 될 수있는 정상 HbF 및 HbA2를 포함합니다. 5, HbA가 사라지고, HbC가 총 헤모글로빈의 28 % -44 %를 차지하며, 헤모글로빈 질환으로 진단 될 수 있으며, 흑인에서 더 흔하며 혈액에서 더 많은 표적 세포를 볼 수 있습니다. 6, HbS가 있고, HbD도 나타나고, 혈액 필름에 표적 세포가 있으며, 중국 북부에서 더 흔한 헤모글로빈 D 질환으로 진단 될 수 있습니다. 7, HbE 전기 영동 결과, 주로 동남 아시아, 인도 등에서 발견하는 헤모글로빈 E 질병으로 진단 할 수 있습니다, 중국은 광동 남부에서 더 일반적입니다. 주의 사항 왁스 섬유 막 전기 영동 직접 비색계 시약 : 셀룰로오스 아세테이트 막의 마이크로 헤모글로빈으로 전기 영동. 운영 : (1) 셀룰로오스 아세테이트 막을 10 분 이상 TEB 완충제 중에서 1/3 (4 cm × 8 cm)로 절단 하였다. (2) 셀룰로오스 아세테이트 필름을 제거하고 여과지를 사용하여 여분의 물을 제거하십시오. 10g의 100g / L 용해 된 혈액을 Hb 피펫에 의해 흡수하고 유리 푸셔의 하부 가장자리에 균일하게 적용하고, 필름의 캐소드 말단으로부터 1.5 내지 2.0cm의 거리에서 매트면 상에 놓았다. 각 시편을 동시에 두 장씩 만듭니다. (3) 전기 영동 : 미량의 헤모글로빈으로 완충액을 전기 영동한다. 전압은 180V이고 시간은 40 분 ~ 1 시간입니다. (각 영역에서 세포가 명확하게 분리되어있다.) 전기 영동 후 전극이 교환되고 완충액이 반복적으로 사용될 수있다. (4) 용출 및 정량 HbA, HbA2 및 HbA2의 크기에 상응하는 제어 구역을 별도로 절단 하였다. 비정상 Hb 구역 (HbX)도 동시에 절단되면 해당 튜브에 배치됩니다. HbA 튜브에 10ml의 TEB 완충제를 첨가하고, 각 튜브에 2ml의 TEB 완충제를 첨가하고, 30 분 동안 담그고, 지속적으로 진탕시킨다. 완전히 용출 된 후. 용리액을 413 nm의 파장을 갖는 721 분광 광도계와 혼합 하였다. 블랭크는 제로화되고 각 튜브의 흡광도가 측정된다. 검사 과정 (1) 미량 헤모글로빈의 전기 영동 : 1 딥 필름 : 셀룰로오스 아세테이트 필름을 TEB 버퍼 표면에 띄우고 균일하게 담가 침몰시킨 후 20 분 이상 사용할 수 있습니다. 기포가 생성되는 것을 방지합니다. 2 도트 : 셀룰로오스 아세테이트 필름을 제거하고 여과지를 사용하여 과도한 물을 제거합니다. 헤모글로빈 용액을 마이크로 피펫으로 흡입하고 멀티 샘플 어플리케이터의 오목한 홈에 놓고 헤모글로빈 용액을 멀티 샘플 피펫으로 채취하여 셀룰로스 아세테이트 필름의 매트면에 스포팅했습니다. 캐소드 말단으로부터 1.5 내지 2 cm, 스포팅의 양은 약 3 내지 5 μl이며, 평행 위치에서의 정상적인 헤모글로빈 용액이 대조군으로 사용된다. 3 전기 영동 : 미세 전기 영동 탱크의 양쪽에있는 버퍼 탱크에 동량의 BB 버퍼 용액을 첨가하고 셀룰로오스 아세테이트 막 지지체의 염다리로 2 층 여과지를 사용하십시오. 필름을 바닥에 무광택시키고, 음극을 스폿으로 종결시키고 5 분 동안 평형화시켰다. 전원을 켜십시오. 전압은 180V이고, 전류량은 약 0.2mA / cm이며, 전기 영동 시간은 20-30 분이다. 탱크의 버퍼는 전극을 전환 한 후 한 번 더 사용할 수 있습니다. 4 염색 : 전기 영동 된 필름을 약 10 분 동안 폰 세오 (Ponceau) 적색 염색 용액에서 꺼내고, 배경이 하얗고 건조 될 때까지 3 % 아세트산으로 여러 번 헹구었다. 5 투명성 : 셀룰로오스 아세테이트 필름을 투명 액체에 담그고 깨끗한 유리판에 접착시킨 후, 그 사이의 기포를 유리 막대로 제거합니다. 소량의 빙초산을 크로마토 그래피 실린더에 붓고, 유리판을 크로마토 그래피 실린더에서 역으로 덮었다 (필름이 안쪽을 향함). 휘발성 빙초산으로 10-20 분 동안 연기를 피우고 투명 할 때 필름을 제거하십시오. (2) 셀룰로스 아세테이트 막 전기 영동 염색 비색법 : 1 TEB 완충액에 담근 4 cm x 6 cm 셀룰로오스 아세테이트 막을 제거하고 여분의 물을 여과지로 닦아냅니다. 무광택 표면의 음극 끝에서 1.5cm 떨어진 곳에 약 5 μl의 50g / L Hb 용액을 선형으로 균일하게 헤모글로빈 피펫으로 포장 한 후, 헤모글로빈 용액이 막에 침투 한 후 막을 전기 영동 탱크 지지판의 여과지 브리지로 뒤집었다. 2 전기 영동 : 전압 180V, 시간 30 ~ 40 분, Hb 구역이 완전히 분리됨. 전극은 전기 영동 후에 교환되고, 전기 영동 버퍼는 여러 번 사용될 수있다. 3 염색 : 필름은 염색 용액에 담그고 겨울에는 2 시간, 여름에는 25 ~ 30 ° C로 염색해야하며 30 분 정도만 염색 할 수 있습니다. 얼룩이 투명하지 않은 경우 (예 : 시간이 너무 짧거나 헤모글로빈 용액이 너무 농축 된 경우) 또는 전압이 너무 높으면 HbA 밴드가 너무 집중되어 있고 리본이 쉽게 벗겨져 정량의 정확도에 영향을줍니다. 배경이 헹굴 때까지 표백 용액으로 여러 번 씻으십시오. 4 정량 : 세정 된 막을 꺼내고, 각각의 구역을 절단하고, HbA2의 크기에 상응하는 대조군 구역을 각각의 상응하는 시험관에 넣었다. 침출수 10 ml를 HbA 튜브에 첨가하고, 나머지 튜브를 2 ml에 침지시키고 20 분 동안 침지시킨 후 때때로 흔들었다. 리본을 완전히 용리시킵니다 (고온에서는 용출 시간이 너무 길지 않아야합니다. 그렇지 않으면 용리액이 파란색으로 감소하고 점차 자주색으로 변합니다). 용출액을 혼합하고, 620 nm의 파장에서 721 분광 광도계를 사용하고 블랭크로 제로화하여 각 튜브의 흡광도를 측정 하였다. 5 계산 : 동일한 직접 비색법. 왁스 섬유 막 전기 영동 직접 비색계 시약 : 셀룰로오스 아세테이트 막의 마이크로 헤모글로빈으로 전기 영동. 운영 : (1) 셀룰로오스 아세테이트 막을 10 분 이상 TEB 완충제 중에서 1/3 (4 cm × 8 cm)로 절단 하였다. (2) 셀룰로오스 아세테이트 필름을 제거하고 여과지를 사용하여 여분의 물을 제거하십시오. 10g의 100g / L 용해 된 혈액을 Hb 피펫에 의해 흡수하고 유리 푸셔의 하부 가장자리에 균일하게 적용하고, 필름의 캐소드 말단으로부터 1.5 내지 2.0cm의 거리에서 매트면 상에 놓았다. 각 시편을 동시에 두 장씩 만듭니다. (3) 전기 영동 : 완충액 및 마이크로 헤모글로빈의 전기 영동. 전압은 180V이고 시간은 40 분 ~ 1 시간입니다. (각 영역에서 세포가 명확하게 분리되어있다.) 전기 영동 후 전극이 교환되고 완충액이 반복적으로 사용될 수있다. (4) 용출 및 정량 HbA, HbA2 및 HbA2의 크기에 상응하는 제어 구역을 별도로 절단 하였다. 비정상 Hb 구역 (HbX)도 동시에 절단되면 해당 튜브에 배치됩니다. HbA 튜브에 10ml의 TEB 완충제를 첨가하고, 각 튜브에 2ml의 TEB 완충제를 첨가하고, 30 분 동안 담그고, 계속 흔들어 준다. 완전히 용출 된 후. 용리액을 413 nm의 파장을 갖는 721 분광 광도계와 혼합 하였다. 블랭크는 제로화되고 각 튜브의 흡광도가 측정된다. 군중에게 적합하지 않음 금기 사항이 없습니다. 부작용 및 위험 감염 위험 : 부정한 바늘을 사용하면 감염의 위험이 있습니다.

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