elettroforesi dell'emoglobina

Diversi punti isoelettrici di varie emoglobine hanno cariche positive e negative diverse in un certo tampone di pH e l'emoglobina si muove in direzioni diverse dopo l'elettroforesi. Informazioni di base Classificazione specialistica: classificazione dell'esame di crescita e sviluppo: esame del sangue Genere applicabile: se uomini e donne applicano il digiuno: il digiuno Suggerimenti: prima dell'esame, la dieta è leggera e l'alcol è vietato. Valore normale Il metodo di elettroforesi era HbA 95%, HbA dal 21,1% al 3,2% e HbA dal 32% al 3%. Il metodo Singer ha un HbF <4%. Significato clinico 1, il componente principale è l'HbS e nessun HbB può essere visto nella malattia dell'emoglobina delle cellule falciformi. 2, HbS, HbF e HbA2 aumentano leggermente, mentre l'HbA raramente o scompare, combinato con l'indagine può essere diagnosticata come anemia HbS-β-marina, più comune nel Mediterraneo. 3, oltre a HbS, contenente 10% -30% di HbA e lieve aumento di HbF e HbA2, si può anche prendere in considerazione l'anemia HbS-β-marina. 4. L'HbS rappresenta il 20% -30%, l'HbA rappresenta il 65% -75% e contiene HbF e HbA2 normali, che possono essere diagnosticati come anemia HbS-α-marina. 5, l'HbA scompare, l'HbC rappresenta il 28% -44% dell'emoglobina totale, può essere diagnosticata come malattia dell'emoglobina, più comune nelle persone di colore, più cellule bersaglio possono essere viste nel sangue. 6, c'è HbS, appare anche HbD, ci sono cellule bersaglio nel film ematico, possono essere diagnosticate come malattia dell'emoglobina D, più comune nella Cina settentrionale. 7, l'HbE si traduce in elettroforesi, può essere diagnosticata come malattia dell'emoglobina E, che si trova principalmente nel sud-est asiatico, in India, ecc., La Cina è più comune nel sud del Guangdong. precauzioni Colorimetria diretta elettroforesi su membrana in fibra di acido ceroso Reagente: elettroforesi con microemoglobina di membrana in acetato di cellulosa. Funzionamento: (1) La membrana di acetato di cellulosa è stata tagliata in 1/3 (4 cm × 8 cm) in tampone TEB per almeno 10 minuti. (2) Rimuovere la pellicola di acetato di cellulosa e utilizzare una carta da filtro per rimuovere l'acqua in eccesso. 10 ml di 100 g / L di sangue disciolto sono stati assorbiti da una pipetta Hb e applicati uniformemente sul bordo inferiore dello spintore di vetro, e sono stati posizionati sul lato opaco a una distanza di 1,5-2,0 cm dall'estremità del catodo del film. Realizzare due copie di ciascun campione contemporaneamente. (3) Elettroforesi: il tampone è elettroforizzato con una traccia di emoglobina. La tensione è di 180 V e il tempo è di 40 minuti ~ 1 ora. (Le celle sono chiaramente separate in ciascuna zona.) Dopo l'elettroforesi, gli elettrodi vengono scambiati e il buffer può essere utilizzato ripetutamente. (4) L'eluizione e la quantificazione HbA, HbA2 e una zona di controllo corrispondente alla dimensione di HbA2 sono state tagliate separatamente. Se anche le zone Hb anomale (HbX) vengono tagliate contemporaneamente, vengono posizionate nei tubi corrispondenti. Aggiungere 10 ml di tampone TEB nella provetta HbA, aggiungere 2 ml di tampone TEB a ciascuna provetta, immergere per 30 minuti, agitare costantemente. Dopo essere stato completamente eluito. L'eluato è stato miscelato e 721 spettrofotometro con una lunghezza d'onda di 413 nm. Il bianco viene azzerato e viene misurata l'assorbanza di ogni provetta. Processo di ispezione (1) Elettroforesi dell'emoglobina in traccia: 1 film di immersione: il film di acetato di cellulosa viene fatto galleggiare sulla superficie del tampone TEB e può essere utilizzato per almeno 20 minuti dopo essere stato immerso e affondato uniformemente. Questo impedisce la generazione di bolle. 2 punti: rimuovere la pellicola di acetato di cellulosa e utilizzare la carta da filtro per rimuovere l'acqua in eccesso. La soluzione di emoglobina è stata aspirata in una micropipetta e collocata in una scanalatura concava di un applicatore multi-campione La soluzione di emoglobina è stata prelevata da una pipetta multi-campione e macchiata su un lato opaco del film di acetato di cellulosa. Tra 1,5 e 2 cm dall'estremità del catodo, la quantità di spotting è tra 3 e 5 μl circa e viene utilizzata come controllo la normale soluzione di emoglobina in posizione parallela. 3 Elettroforesi: aggiungere una quantità uguale di soluzione tampone BB nel serbatoio tampone su entrambi i lati del serbatoio per microelettroforesi e utilizzare una carta da filtro a due strati come ponte salino sul supporto della membrana in acetato di cellulosa. Il film era opaco sul fondo e l'elettrodo negativo è stato terminato da un punto ed equilibrato per 5 minuti. Accendi il potere. La tensione è di 180 V, la quantità di corrente è di circa 0,2 mA / cm e il tempo di elettroforesi è di 20-30 minuti. Il buffer nel serbatoio può essere utilizzato ancora una volta dopo aver cambiato gli elettrodi. 4 Colorazione: il film elettroforizzato è stato rimosso nella soluzione di colorazione rossa Ponceau per circa 10 minuti e sciacquato più volte con acido acetico al 3% fino a quando lo sfondo è stato bianco ed essiccato. 5 Trasparente: il film di acetato di cellulosa viene immerso in un liquido trasparente, fatto aderire a una lastra di vetro pulita e le bolle tra i due vengono rimosse da un'asta di vetro. Una piccola quantità di acido acetico glaciale è stata versata in un cilindro cromatografico e la lastra di vetro è stata coperta al contrario sul cilindro cromatografico (con il film rivolto verso l'interno). Fumare con acido acetico glaciale volatile da 10 a 20 minuti e rimuovere il film quando è trasparente. (2) Metodo colorimetrico di colorazione elettroforetica su membrana in acetato di cellulosa: 1 Rimuovere la membrana di acetato di cellulosa da 4 cm × 6 cm imbevuta di tampone TEB e asciugare l'acqua in eccesso con carta da filtro. A una distanza di 1,5 cm dall'estremità del catodo della superficie opaca, circa 5 μl di una soluzione Hb da 50 g / L sono stati imballati linearmente e uniformemente con una pipetta di emoglobina. Dopo che la soluzione di emoglobina è penetrata nella membrana, la membrana è stata invertita su un ponte di carta da filtro della piastra di supporto del serbatoio di elettroforesi. 2 Elettroforesi: tensione 180 V, tempo 30 ~ 40 minuti, soggetto a completa separazione delle zone Hb. L'elettrodo viene sostituito dopo l'elettroforesi e il tampone per elettroforesi può essere utilizzato più volte. 3 Tintura: il film viene immerso nella soluzione di tintura e deve essere tinto per 2 ore in inverno e 25 ~ 30 ° C in estate. Può essere tinto solo per circa 30 minuti. Si noti che se la colorazione non è trasparente (come il tempo è troppo breve o la soluzione di emoglobina è troppo concentrata) o la tensione è troppo alta, la banda HbA è troppo concentrata e il nastro si stacca facilmente, il che influisce sulla precisione della quantificazione. Lavare più volte con la soluzione sbiancante fino a quando lo sfondo viene risciacquato. 4 Quantificazione: la membrana sciacquata è stata rimossa, ciascuna zona è stata tagliata e una zona di controllo corrispondente alla dimensione di HbA2 è stata collocata in ciascuna corrispondente provetta. 10 ml di percolato sono stati aggiunti alla provetta HbA e le rimanenti provette sono state immerse in 2 ml, immerse per 20 minuti e agitate di volta in volta. Rendere il nastro completamente eluito (notare che a temperature più elevate, il tempo di eluizione non dovrebbe essere troppo lungo, altrimenti il ​​blu dell'eluente diminuirà e diventerà gradualmente viola). L'eluato è stato miscelato e l'assorbanza di ciascuna provetta è stata misurata utilizzando uno spettrofotometro 721 a una lunghezza d'onda di 620 nm e azzerando con un bianco. 5 calcolo: la stessa colorimetria diretta. Colorimetria diretta elettroforesi su membrana in fibra di acido ceroso Reagente: elettroforesi con microemoglobina di membrana in acetato di cellulosa. Funzionamento: (1) La membrana di acetato di cellulosa è stata tagliata in 1/3 (4 cm × 8 cm) in tampone TEB per almeno 10 minuti. (2) Rimuovere la pellicola di acetato di cellulosa e utilizzare una carta da filtro per rimuovere l'acqua in eccesso. 10 μl di sangue disciolto da 100 g / L sono stati assorbiti da una pipetta Hb e applicati uniformemente sul bordo inferiore dello spintore di vetro, e sono stati posizionati sul lato opaco a una distanza compresa tra 1,5 e 2,0 cm dall'estremità del catodo del film. Realizzare due copie di ciascun campione contemporaneamente. (3) Elettroforesi: elettroforesi del buffer e della microemoglobina. La tensione è di 180 V e il tempo è di 40 minuti ~ 1 ora. (Le celle sono chiaramente separate in ciascuna zona.) Dopo l'elettroforesi, gli elettrodi vengono scambiati e il buffer può essere utilizzato ripetutamente. (4) L'eluizione e la quantificazione HbA, HbA2 e una zona di controllo corrispondente alla dimensione di HbA2 sono state tagliate separatamente. Se anche le zone Hb anomale (HbX) vengono tagliate contemporaneamente, vengono posizionate nei tubi corrispondenti. Aggiungere 10 ml di tampone TEB nella provetta HbA, aggiungere 2 ml di tampone TEB a ciascuna provetta, immergere per 30 minuti, agitare costantemente. Dopo essere stato completamente eluito. L'eluato è stato miscelato e 721 spettrofotometro con una lunghezza d'onda di 413 nm. Il bianco viene azzerato e viene misurata l'assorbanza di ogni provetta. Non adatto alla folla Nessun tabù. Reazioni e rischi avversi Rischio di infezione: se si utilizza un ago sporco, si può essere a rischio di infezione.

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