IgE secretorie nell'espettorato

Il sito di SIgE è simile a quello di SIgA ed è anche prodotto da plasmacellule nella lamina propria del tratto respiratorio, distribuito nei tessuti della mucosa e nei fluidi esocrini, che sono il sito di invasione di allergeni e il sito di reazioni allergiche. Le IgE sono un monomero, 8S, 19 × 104 ku e la sua catena pesante è più lunga della catena γ. Un'altra regione funzionale (CH4), che può legarsi alle cellule (come mastociti, basofili) e innescare il rilascio di sostanze bioattive intracellulari in determinate condizioni, pertanto l'IgE è il principale anticorpo che causa allergia di tipo I. . Informazioni di base Classificazione specialistica: Classificazione dell'esame respiratorio: esame dell'espettorato Genere applicabile: se uomini e donne applicano il digiuno: il digiuno Promemoria: se i componenti principali del reagente vengono preparati in modo improprio o conservati in modo improprio, vengono facilmente degradati e inattivati. Valore normale Da 0,1 a 9 mg / L. Significato clinico Aumento: IgE è monomero, 8S, 19 × 104ku e la sua catena pesante è più lunga della catena γ. Un'altra regione funzionale (CH4), che può legarsi alle cellule (come mastociti, basofili) e innescare il rilascio di sostanze bioattive intracellulari in determinate condizioni, pertanto l'IgE è il principale anticorpo che causa allergia di tipo I. . Nei pazienti con asma bronchiale e polmonite da ipersensibilità, il contenuto di SIg nell'espettorato può essere aumentato. Alti risultati possono essere malattie: asma bronchiale, polmonite allergica I principali componenti del reagente nell'ELISA, come antigeni, anticorpi, coniugati enzimatici, substrati, ecc., Sono facilmente degradati e inattivati ​​se non adeguatamente preparati o conservati in modo improprio. Ci sono molti passaggi nell'ELISA e se l'operazione non è standardizzata, è difficile ottenere risultati accurati. Pertanto, al fine di garantire l'efficacia del test, è necessario eseguire un controllo di qualità per ciascun test. I controlli positivi e negativi forniti negli eccellenti kit possono essere generalmente utilizzati come controllo di qualità del test. Secondo le istruzioni, l'efficacia del test può essere valutata sulla base dei valori di assorbanza ottenuti. Prendendo ad esempio il test HBsAg più comunemente usato nei test clinici, il controllo negativo nel kit deve essere siero umano negativo per HBsAg e il controllo positivo deve indicare il contenuto di HBsAg (ad es. 9 ± 2 ng / ml). Tre controlli negativi e due controlli positivi devono essere effettuati contemporaneamente per ogni lotto di test. Il valore di assorbanza ottenuto dal test di controllo negativo dovrebbe essere inferiore a un certo valore (ad esempio, 0,100) e il valore medio dell'assorbanza di controllo positivo meno l'assorbanza di controllo negativa dovrebbe essere maggiore di un certo valore (ad esempio, 0,200). Questi valori sono specifici valori sperimentali per il kit nelle condizioni di dosaggio specificate. Pertanto, se i risultati del test soddisfano i requisiti, indica sia l'efficacia dei reagenti utilizzati sia la correttezza dell'operazione.Solo in questo caso, il test batch è efficace. Alcuni dei controlli positivi e negativi contenuti nel kit non soddisfano i requisiti per il controllo di qualità, né le condizioni di misurazione del laboratorio come colorimetro, ecc., E la differenza nella descrizione del kit, la qualità appropriata dovrebbe essere utilizzata in base alla situazione reale. Controlli e valori di controllo di qualità dal laboratorio derivati ​​dall'esperimento. Il siero di controllo qualità della merce è costoso. La determinazione qualitativa dei prodotti per il controllo di qualità ELISA può essere generalmente preparata da soli. Il test HBsAg è ancora preso come esempio. Controlli negativi possono essere prelevati da donatori di sangue che sono HBsAg negativi con reagenti di alta qualità. Il controllo positivo può essere preparato aggiungendo una quantità appropriata di siero positivo per HBsAg al siero di controllo negativo e confrontando il siero miscelato con uno standard di riferimento o un controllo quantitativo per determinare il contenuto di HBsAg. Quindi, viene eseguita un'adeguata diluizione per ottenere il siero HBsAg positivo della concentrazione desiderata, quindi viene aggiunta una quantità appropriata di conservanti antibatterici come gentamicina e acido salicilico, e quindi crioconservati a bassa temperatura. Processo di ispezione ELISA è un metodo di prova multi-reazione, multi-reagente e multi-passo, che deve essere gestito con cura e attenzione secondo i requisiti, altrimenti non si otterranno risultati accurati. Le procedure ELISA utilizzate per rilevare elementi diversi sono leggermente diverse, ma includono passaggi come caricamento, mantenimento, lavaggio e colorimetria, i punti operativi di ciascun passaggio sono descritti di seguito. 1. Preparazione del reagente: diluire o preparare i reagenti richiesti per il test secondo le istruzioni del kit. L'acqua distillata o deionizzata utilizzata nell'ELISA, anche per il lavaggio, deve essere fresca e di alta qualità. Il tampone autonomo deve essere misurato con un pHmetro. La temperatura del reagente di prova estratto dal frigorifero deve essere utilizzata dopo aver raggiunto la temperatura ambiente. Nei test che utilizzano HRP come marker, i contenitori contaminati con metallo non sono disponibili. 2. Caricamento: preparare una buona piastra ELISA come richiesto. I campioni di siero (fluido per la pelle) devono essere raccolti di recente o conservati correttamente in frigorifero e non si devono usare campioni altamente emolizzati o torbidi. I campioni contenenti sodio azide come conservante non sono disponibili per l'ELISA in una fase per l'etichettatura della HRP. Quando si aggiunge il campione, aggiungere il campione nella parte inferiore del foro, evitare di aggiungerlo alla parte superiore della parete del foro e fare attenzione a non schizzarlo e non dovrebbero apparire bolle d'aria. L'accuratezza della quantità di campione aggiunta nella determinazione quantitativa dovrebbe soddisfare i requisiti quantitativi. Nella misurazione qualitativa, l'accuratezza della quantità del campione a volte non viene enfatizzata, ad esempio, viene prescritta come una goccia. A questo punto, dovresti usare lo stesso contagocce di diametro e mantenere la posizione di carico corretta in modo che il volume di ogni goccia sia sostanzialmente lo stesso. L'operazione e i requisiti per l'aggiunta del coniugato enzimatico e l'aggiunta del substrato sono gli stessi dell'aggiunta del campione. 3. Isolamento: ci sono generalmente due reazioni antigene-anticorpo nell'ELISA, cioè dopo l'aggiunta del campione e dopo l'aggiunta della combinazione. A questo punto, la temperatura e il tempo della reazione dovrebbero essere accurati quanto basta. Il contenitore isolato è preferibilmente un bagno d'acqua e il fondo della piastra ELISA deve essere posizionato nell'acqua per bilanciare rapidamente la temperatura. Ogni piastra ELISA non deve essere sovrapposta. Per evitare l'evaporazione, la scheda dovrebbe essere coperta. La piastra può anche essere posizionata piatta in una scatola bagnata con una garza bagnata sul fondo. La scatola bagnata deve essere preriscaldata alla temperatura specificata, ad esempio l'isolamento dell'incubatore è più importante. 4, lavaggio: il lavaggio nel processo ELISA non è una fase di reazione, ma ha deciso di chiudere la chiave del successo. Lo scopo del lavaggio è di lavare via le sostanze nella soluzione di reazione che sono legate all'antigene o all'anticorpo in fase solida e le sostanze interferenti che non sono specificamente assorbite dal veicolo in fase solida durante la reazione. L'adsorbimento di proteine ​​da parte di materie plastiche come il polistirolo è universale, quindi l'adsorbimento non specifico dovrebbe essere evitato il più possibile durante il test ELISA e questa sostanza interferente non specificamente assorbita dovrebbe essere lavata via durante il lavaggio. L'aggiunta di Tween al liquido di lavaggio può migliorare l'effetto di lavaggio. Se il lavaggio non è accurato, specialmente l'ultima volta, se si verifica un adsorbimento non specifico del coniugato enzimatico, il valore del bianco verrà aumentato. Inoltre, nel metodo indiretto, se le IgG non specifiche nel campione vengono adsorbite sulla fase solida senza essere lavate, interferiranno anche con l'anticorpo marcato con l'enzima. La piastra ELISA viene generalmente lavata con i seguenti metodi: 1 assorbendo la soluzione di reazione; 2 riempiendo la piastra con la soluzione di lavaggio; 3, posizionandola per 2 minuti, agitando leggermente; 4 assorbendo o versando il liquido nel foro e picchiettandolo sulla carta assorbente. Il numero di lavaggi è generalmente da 3 a 4 volte e talvolta anche da 5 a 6 volte. È inoltre possibile utilizzare una rondella automatica ELISA a piastre, ma è necessario verificare prima l'effettivo utilizzo dello strumento. Ogni pipetta della rondella deve anche essere posizionata vicino alla parte inferiore del foro corrispondente. Al fine di garantire lo stesso effetto di lavaggio di ciascun foro. 5. Sviluppo del colore e colorimetria: la temperatura e il tempo della reazione dopo l'aggiunta del substrato nella determinazione quantitativa devono essere ancora accurati secondo le normative. Tuttavia, la reazione può essere generalmente condotta a temperatura ambiente in un saggio qualitativo. Se il substrato è OPD, deve essere posizionato lontano dalla luce. Non è necessario controllare rigorosamente il tempo di reazione, e talvolta la soluzione di arresto può essere aggiunta nel tempo in base alla colorazione del controllo positivo e del controllo negativo. Per garantire lo stesso tempo di reazione per ciascun pozzetto, la procedura e la velocità di aggiunta della soluzione di arresto dovrebbero essere le stesse di quando si aggiunge il substrato. La determinazione qualitativa, come una reazione negativa, è leggera e talvolta i risultati possono essere giudicati visivamente. La placca ELISA generalmente utilizza un lettore di etichette enzimatiche per leggere l'assorbanza a una lunghezza d'onda specificata. Il lettore automatico di etichette deve essere testato per verificare la compatibilità con i pozzetti della piastra ELISA utilizzata e la ripetibilità dei risultati prima dell'uso. Quando colorimetrico, controllare prima il punto zero con acqua distillata, leggere i pori del substrato (i pori senza alcuna reazione e aggiungere solo il substrato) e i pozzetti vuoti (i pori misurati dalla soluzione salina o PBS invece del campione per l'intero processo) per registrare questo tempo. Lo stato del reagente del test. Successivamente, è possibile utilizzare il foro vuoto per calibrare il punto zero e leggere l'assorbanza del foro campione, il foro standard e il foro di controllo. Se il punto zero è ancora corretto dall'acqua distillata, l'assorbanza dei fori di cui sopra dovrebbe essere sottratta dall'assorbanza dei fori vuoti nel calcolo. Non adatto alla folla Persone non appropriate: generalmente non ci sono persone che non sono adatte. Reazioni e rischi avversi Nessuna reazione avversa

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