Test de transformation des lymphocytes PHA

Le test de transformation lymphocytaire PHA est un changement morphologique et biochimique dans lequel les lymphocytes T et les mitogènes sont co-cultivés in vitro, et certains petits lymphocytes sont transformés en cellules mères immatures et soumis à la mitose. Méthode Informations de base Classification de spécialiste: Classification d'examen d'oncologie: examen immunitaire Sexe applicable: si les hommes et les femmes appliquent le jeûne: pas le jeûne Conseils: Veillez à avoir une alimentation saine et à rester de bonne humeur. Valeur normale Comptage des lymphocytes 200, identification des lymphoblastes (plus de 2 à 4 fois plus que les lymphocytes normaux, membrane nucléaire claire, plaque nucléaire lâche, noyau fin, nucléoles évidents, cytoplasme abondant, basophile), en transition Lymphocytes (moins de changement de volume, seulement les changements nucléaires évidents mentionnés ci-dessus), de petits lymphocytes (légèrement plus gros que les globules rouges, chromatine nucléaire dense, pas de nucléoles), le taux de conversion a été compté. Le taux de conversion dermatologique normal est supérieur à 58%. Signification clinique La diminution du taux de transformation des lymphocytes PHA est une réponse à une diminution de la fonction immunitaire cellulaire. Cet examen dermatologique est principalement utilisé pour la classification des maladies (comme la lèpre), le jugement de la maladie (comme les tumeurs malignes de la peau), l’observation de l’efficacité des médicaments et certaines études sur le déficit immunitaire et les affections cutanées allergiques. Résultat anormal Divers symptômes causés par une diminution de la fonction immunitaire. La personne nécessitant un examen est soupçonnée de souffrir de symptômes de lèpre ou de malignité de la peau. Précautions 1. La composition du support a une grande influence sur le taux de conversion, faites attention à sa période effective. 2. Le sérum de veau doit être inactivé avant utilisation. 3. Lors de la mise en culture, assurez-vous qu'il y a suffisamment de gaz.En général, la quantité totale de liquide dans le flacon de culture de 10 ml ne doit pas dépasser 2 ml. 4. Une dose excessive de PHA est toxique pour les cellules et trop petite pour stimuler la transformation des lymphocytes. La dose de réaction de conversion du PHA doit être déterminée avant le test. 5. Une expérience aseptique stricte doit être réalisée dans le cadre de l’expérience afin de prévenir la pollution. Tabou avant le test: faites attention à une alimentation saine et gardez la bonne humeur. Conditions d'inspection: coopérer activement avec le médecin. Processus d'inspection Méthode d'opération: 1. Prendre un anticoagulant héparine aseptique 0, 1 ml, ajouter 1,8 ml de milieu de culture cellulaire, ajouter 1 000 μg / ml de PHA0,1 ml, tube de contrôle sans PHA, cultiver les cellules à 37 ° C, 5% de CO2 pendant 3 jours, agiter 1 fois par jour. Fois. 2. À la fin de la culture, la plus grande partie du surnageant a été rejetée et 8,5 g / L de NH4Cl ont été ajoutés, mélangés et placés dans un bain-marie à 37 ° C pendant 10 min. Centrifuger à 3,2500 tr / min pendant 10 min, jeter le surnageant, ajouter 5 ml de fixateur au culot et laisser reposer à température ambiante pendant 5 min. Centrifuger à 4,2500 tr / min pendant 10 min, jeter le surnageant, laisser 0,2 ml de cellules agglomérées pour la compression et sécher rapidement. 5. La solution de teinture Giemsa est colorée pendant 10 à 20 minutes, lavée à l'eau et séchée. 6. Oil Mirror Compte le nombre de cellules transformées dans 200 lymphocytes et calcule le taux de conversion. Le résultat est jugé: 1. Critères morphologiques des lymphoblastes: la taille du noyau, le rapport noyau / cytoplasme, la coloration du cytoplasme et la structure du noyau et la présence ou non de nucléoles. (1) Petits lymphocytes matures: la taille des petits lymphocytes non cultivés est de 6 à 8 µm, la coloration nucléaire est dense, pas de nucléoles, le rapport entre le nucléaire et le cytoplasme est grand, et le cytoplasme est coloré à basophile doux. (2) lymphocytes de transition: plus gros que les petits lymphocytes, environ 10 ~ 20 µm, la coloration nucléaire est dense, mais des nucléoles apparaissent, ce qui est le point clé pour l'identification des petits lymphocytes matures. (3) lymphoblastes: le volume cellulaire augmente, environ 20 ~ 30μm, la forme n'est pas nette, souvent petite saillie, hypertrophie nucléaire, coloration nucléaire lâche, il y a 1 ou 2 nucléoles, élargissement du cytoplasme, souvent cytoplasme Bulle vide. (4) Autres cellules: par exemple, après une culture de neutrophiles pendant 72 heures, la carie ou la mort est en grande partie causée par la fragmentation. 2. Calcul du taux de transformation des lymphocytes La tête, le corps et la queue ont été examinés selon la classification ci-dessus et 200 lymphocytes ont été comptés pour calculer le pourcentage. Les lymphocytes transformés comprennent les lymphoblastes et les lymphocytes en transition, et les lymphocytes non transformés désignent les petits lymphocytes matures. Dans des circonstances normales, le taux de transformation lymphocytaire induite par la PHA est compris entre 60 et 80%. S'il est compris entre 50 et 60%, il est faible et, lorsqu'il est égal ou inférieur à 50%, il est diminué. Selon les résultats, le bon jugement est obtenu. Ne convient pas à la foule Foule inappropriée: temporairement inconnue. Effets indésirables et risques Il n'y a pas de complications ni de risques associés.

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