Examen de la chromatine des cellules du liquide amniotique

L'amniocentèse permet de déterminer le sexe du fœtus et de diagnostiquer indirectement les maladies sexuellement transmissibles, telles que les malformations congénitales, les anomalies métaboliques congénitales, les anomalies chromosomiques et les maladies sexuellement transmissibles, prévenant ainsi la naissance d'enfants porteurs de ces maladies génétiques. . L'amniocentèse est généralement réalisée au cours du deuxième trimestre (16-21 semaines de gestation). L'urine doit être drainée avant la chirurgie, avec les deux mains sur les hanches et tourner doucement la taille et l'abdomen. Ensuite, en supination, utilisez B-ultrasons pour détecter le positionnement, sélectionnez le point de perforation et perforez dans des conditions de fonctionnement aseptiques strictes. Informations de base Catégorie de spécialiste: Vérification de l'examen maternel Catégorie: Test génétique (ADN) Sexe applicable: si les femmes jeûnent: jeûner Résultats d'analyse: En dessous de la normale: Valeur normale: Non Au-dessus de la normale: Négatif: La valeur normale est négative: chromatine X:> 0,06 pour le fœtus féminin et 0,05 pour le fœtus masculin, Positif: La probabilité d'une maladie récessive récessive liée à l'X est déterminée sur la base des résultats. Conseils: L'amniocentèse est généralement réalisée au cours du deuxième trimestre (16-21 semaines de gestation). Valeur normale X chromatine> 0,06 pour les fœtus féminins, <0,05 pour les fœtus masculins. Y chromatine> 0,05 est un fœtus masculin et <0,04 est un fœtus féminin. Signification clinique Pour les familles ayant des antécédents familiaux de maladies héréditaires récessives liées à l'X, le phénotype parental est normal: si la mère est porteuse du gène causant la maladie, la probabilité que le fils de l'enfant soit à 50%, la fille étant phénotypiquement normale Peut être un transporteur. Lorsque le père est un patient, le fils est tout à fait normal et la fille est tout porteur, tels que l'hémophilie A, l'hémophilie B, le déficit en glucose-6-phosphate déshydrogénase, la cécité rouge-verte, la dystrophie musculaire pseudohypertrophique, Déficit congénital en gamma globuline. Des résultats positifs peuvent être des maladies: daltonisme, précautions pour l'hémophilie L'amniocentèse est généralement réalisée au cours du deuxième trimestre (16-21 semaines de gestation). L'urine doit être drainée avant la chirurgie, avec les deux mains sur les hanches et tourner doucement la taille et l'abdomen. Ensuite, en supination, utilisez B-ultrasons pour détecter le positionnement, sélectionnez le point de perforation et perforez dans des conditions de fonctionnement aseptiques strictes. En général, environ 20 ml de liquide amniotique sont prélevés et placés dans un tube à centrifuger propre et stérilisé pour inspection immédiate. Processus d'inspection (1) Prendre 15 à 30 ml de liquide amniotique pendant 16 à 20 semaines de grossesse et centrifuger à 1 000 tr / min pendant 10 min. (2) Jeter le surnageant en excès, laisser 1 ml de liquide amniotique et de cellules précipitées et disperser doucement dans une suspension cellulaire. (3) Transférer dans un ballon de culture carré de 25 ml, ajouter 3 ml d'un milieu ayant un pH de 6,5 à 6,8 (contenant 100 U / ml de pénicilline, 100 µg / ml de streptomycine) et 1 ml de sérum de veau, puis incuber dans un incubateur à 37 ° C. (4) Un grand nombre de colonies de cellules ressemblant à des fibroblastes ou épithélioïdes ont été observées après 7 à 10 jours de culture. Le milieu frais peut être échangé à ce moment. (5) Lorsque les colonies de cellules sont développées en fragments et qu'il existe de nombreuses cellules de division circulaires translucides, de la colchicine peut être ajoutée pour obtenir une concentration finale de 0,1-0,3 µg / ml, puis cultivée dans un incubateur à 37 ° C pendant 5-6 h. (Les procédures ci-dessus sont toutes effectuées dans des conditions d'asepsie). Normes de récolte: 1 avec les fibroblastes comme type principal, la croissance des cellules, 2 avec 10 oculaires et 20 fois d'observation objective, les clones de cellules en croissance couvrent un ou plusieurs champs de vision complets, 3 voir plus de 10 translucides Cellules rondes et plus de 10 doubles cellules de division brillantes rondes. (6) Si les cellules ne se développent pas vigoureusement, si le cycle de croissance n'est pas uniforme ou si les cellules vieillissent et si le standard de récolte n'est pas atteint, la sous-culture peut être poursuivie dans la bouteille d'origine. Méthode: Dans des conditions stériles, la solution de culture a tout d'abord été versée et quelques gouttes d'une solution de trypsine stérile à 2,5 g / L ont été ajoutées, puis le mélange a été agité et versé. En outre, 5 à 10 gouttes de trypsine ont été ajoutées et secouées doucement à 37 ° C pendant environ 5 minutes pour provoquer la chute des cellules adhérentes. On ajoute 4 ml de milieu frais contenant du sérum de veau et on laisse la culture reposer à 37 ° C pendant 4 à 5 heures. Changer soigneusement le milieu de culture et poursuivre la culture, elle peut être récoltée 3 à 5 jours après le passage. (7) Transférer la solution de culture dans un tube à centrifuger gradué, ajouter 1 ml de solution de trypsine ED-TA au ballon, placer dans un incubateur à 37 ° C pendant 5 min, puis rincer les cellules adhérentes avec une pipette à coude (2,5 g / peut également être utilisé). Digestion de la solution de trypsine). Les cellules détachées de la paroi de la bouteille ont été versées dans un tube à centrifuger, mélangées à la phase liquide de culture initiale et le flacon de culture a été lavé avec une petite quantité de solution saline physiologique chaude. Les cellules lavées ont également été versées dans le tube à centrifuger et centrifugées à 1000 tr / min pendant 10 min. (8) Aspirer le surnageant, ajouter 3 à 5 ml de solution hypotonique à 0,075 mol / L de KCl préchauffée à 37 ° C et fixer à 37 ° C pendant 10 à 15 min. (9) La pré-fixation, la fixation et la préparation sont identiques à la méthode de préparation des échantillons de chromosomes de cellules sanguines périphériques. Ne convient pas à la foule 1. Il y avait des signes d'avortement pendant la grossesse. 2. Lorsque la température corporelle dépasse 37,5 ° C. 3. Exfoliation précoce du placenta, infection abdominale et purulente. Effets indésirables et risques (1) Blessure maternelle: piqûre d'aiguille à piquer dans les vaisseaux sanguins causée par un hématome de la paroi abdominale, un hématome sous-séreux utérin. De temps en temps, le liquide amniotique pénètre dans la circulation sanguine maternelle à partir du trou de ponction et provoque une embolie du liquide amniotique. La vessie n'a pas été vidée avant la ponction et la vessie a été blessée. (2) Blessure du fœtus, du placenta et du cordon ombilical: l'aiguille de ponction peut endommager le fœtus et provoquer un saignement. Le placenta et le cordon ombilical peuvent également provoquer un saignement ou un hématome. Par conséquent, la source du saignement doit être identifiée lors de la prise de liquide amniotique hémorragique. Si vous pensez que vous êtes un fœtus, vous devez continuer à écouter le cœur du fœtus. (3) Fuite de liquide amniotique: le liquide amniotique postopératoire fuit du trou d'épingle, causant trop peu de liquide amniotique, affectant le développement du fœtus et même provoquant une fausse couche ou une naissance prématurée. (4) avortement ou naissance prématurée: l'incidence d'avortement ou d'accouchement prématuré est de 0,1% à 0,2%, se produit souvent dans la semaine qui suit la chirurgie, même après la ponction, une rupture prématurée de la membrane entraîne un accouchement prématuré. (5) infection intra-utérine: il peut y avoir une fièvre maternelle après la chirurgie. Une infection intra-utérine peut provoquer un développement fœtal anormal, voire la mort du fœtus. Par conséquent, l'amniocentèse doit être strictement aseptique.

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