IgE sécrétoires dans les crachats

Le site de SIgE est similaire à celui de SIgA et est également produit par les cellules plasmatiques de la lamina propria des voies respiratoires, réparties dans les tissus muqueux et les fluides exocrines, sites d'invasion des allergènes et de réactions allergiques. L'IgE est un monomère 8S, 19 × 104 ku et sa chaîne lourde est plus longue que la chaîne γ. Une autre région fonctionnelle (CH4), qui peut se lier aux cellules (comme les mastocytes, les basophiles) et déclencher la libération de substances bioactives intracellulaires dans certaines conditions, l’IgE étant donc le principal anticorps à l’origine de l’allergie de type I. . Informations de base Classification de spécialiste: Classification de l'examen respiratoire: examen des expectorations Sexe applicable: si les hommes et les femmes appliquent le jeûne: le jeûne Rappel: Si les composants du réactif principal ne sont pas correctement préparés ou stockés, ils sont facilement dégradés et inactivés. Valeur normale 0,1 à 9 mg / L. Signification clinique Augmentation: IgE est un monomère, 8S, 19 × 104ku, et sa chaîne lourde est plus longue que la chaîne γ. Une autre région fonctionnelle (CH4), qui peut se lier aux cellules (comme les mastocytes, les basophiles) et déclencher la libération de substances bioactives intracellulaires dans certaines conditions, l’IgE étant donc le principal anticorps à l’origine de l’allergie de type I. . Chez les patients atteints d'asthme bronchique et de pneumopathie d'hypersensibilité, le contenu en SIgE dans les expectorations peut être augmenté. Des résultats élevés peuvent être des maladies: asthme bronchique, pneumonie allergique Les composants de réactif principaux de l'ELISA, tels que les antigènes, les anticorps, les conjugués d'enzymes, les substrats, etc., sont facilement dégradés et inactivés s'ils ne sont pas préparés correctement ou stockés de manière incorrecte. La procédure ELISA comporte de nombreuses étapes et, si l'opération n'est pas normalisée, il est difficile d'obtenir des résultats précis. Par conséquent, afin de garantir l'efficacité du test, un contrôle de qualité doit être effectué pour chaque test. Les contrôles positifs et négatifs fournis dans les excellents kits peuvent généralement être utilisés comme contrôle de qualité du test Selon les instructions, l'efficacité du test peut être évaluée à l'aide des valeurs d'absorbance obtenues. En prenant comme exemple le test HBsAg le plus couramment utilisé dans les tests cliniques, le contrôle négatif dans le kit devrait être du sérum humain HBsAg négatif, et le contrôle positif devrait indiquer une teneur en HBsAg (par exemple, 9 ± 2 ng / ml). Trois contrôles négatifs et deux contrôles positifs doivent être réalisés simultanément pour chaque lot d’essais. La valeur d'absorbance obtenue par le test de contrôle négatif doit être inférieure à une certaine valeur (par exemple, 0,100) et la valeur moyenne de l'absorbance du contrôle positif moins l'absorbance du contrôle négatif doit être supérieure à une certaine valeur (par exemple, 0,200). Ces valeurs sont des valeurs expérimentales spécifiques pour le kit dans les conditions de dosage spécifiées. Par conséquent, si les résultats du test répondent aux critères, cela indique à la fois l’efficacité des réactifs utilisés et l’exactitude de l’opération. Dans ce cas seulement, le test par lot est efficace. Certains des contrôles positifs et négatifs contenus dans le kit ne répondent pas aux exigences de contrôle de la qualité, ni aux conditions de mesure du laboratoire telles que le colorimètre, etc., et la différence dans la description du kit, la qualité appropriée doit être utilisée en fonction de la situation réelle. Les contrôles et les valeurs de contrôle de la qualité du laboratoire sont dérivés de l'expérience. Le sérum de contrôle de la qualité de la marchandise est coûteux. La détermination qualitative des produits de contrôle de qualité ELISA peut généralement être préparée par eux-mêmes. Le test HBsAg est toujours pris comme exemple. Des témoins négatifs peuvent être prélevés sur des donneurs de sang qui sont négatifs pour l’HBsAg avec des réactifs de haute qualité. Le contrôle positif peut être préparé en ajoutant une quantité appropriée de sérum HBsAg positif au sérum de contrôle négatif et en comparant le sérum mélangé à un étalon de référence ou à un contrôle quantitatif afin de déterminer la teneur en HBsAg. Ensuite, une dilution appropriée est réalisée pour obtenir le sérum HBsAg-positif de la concentration souhaitée, puis une quantité appropriée de conservateurs antibactériens tels que la gentamicine et l'acide salicylique est ajoutée, puis cryoconservée à basse température. Processus d'inspection ELISA est une méthode de test multi-réactifs, multi-réactifs, multi-étapes, qui doit être manipulée avec soin, conformément aux exigences, sinon des résultats précis ne seront pas obtenus. Les procédures ELISA utilisées pour détecter différents articles sont légèrement différentes, mais comprennent des étapes telles que le chargement, la conservation, le lavage et la colorimétrie. Les points de fonctionnement de chaque étape sont décrits ci-dessous. 1. Préparation des réactifs: Diluez ou préparez les réactifs nécessaires à l’essai conformément aux instructions du kit. L'eau distillée ou déminéralisée utilisée dans le test ELISA, y compris pour le lavage, doit être fraîche et de haute qualité. Le tampon autonome doit être mesuré avec un pH-mètre. La température du réactif de test sorti du réfrigérateur doit être utilisée après avoir atteint la température ambiante. Lors des tests utilisant HRP comme marqueur, les conteneurs contaminés par du métal ne sont pas disponibles. 2. Chargement: Préparez une bonne plaque ELISA selon les besoins. Les échantillons de sérum (fluide cutané) doivent être fraîchement collectés ou correctement stockés dans un réfrigérateur. Les échantillons fortement hémolysés ou troubles ne doivent pas être utilisés. Les échantillons contenant de l'azide de sodium en tant que conservateur ne sont pas disponibles pour l'analyse ELISA en une étape pour le marquage HRP. Lors de l'ajout de l'échantillon, ajoutez l'échantillon au fond du trou, évitez de l'ajouter à la partie supérieure de la paroi du trou et veillez à ne pas l'éclabousser et aucune bulle d'air ne devrait apparaître. L'exactitude de la quantité d'échantillon ajoutée lors de la détermination quantitative doit répondre aux exigences quantitatives. Dans la mesure qualitative, l’exactitude de la quantité de l’échantillon n’est parfois pas soulignée, par exemple, elle est prescrite sous forme de goutte. À ce stade, vous devez utiliser le compte-gouttes de même diamètre et conserver la position de chargement correcte afin que le volume de chaque goutte soit pratiquement le même. Le fonctionnement et les conditions requises pour l’addition du conjugué enzymatique et du substrat sont les mêmes que pour l’ajout de l’échantillon. 3. Isolation: Il y a généralement deux réactions antigène-anticorps dans l'ELISA, à savoir après l'addition de l'échantillon et après l'addition de la combinaison. A ce moment, la température et l'heure de la réaction doivent être aussi précises que nécessaire. Le récipient isolé est de préférence un bain d’eau et le fond de la plaque ELISA doit être placé dans l’eau pour équilibrer rapidement la température. Chaque plaque ELISA ne doit pas être empilée. Pour éviter l’évaporation, le panneau doit être recouvert. La plaque peut également être placée à plat dans une boîte humide avec une gaze humide au fond. La boîte humide doit être préchauffée à la température spécifiée, par exemple, l'isolation de l'incubateur est plus importante. 4, lavage: laver dans le processus ELISA n'est pas une étape de réaction, mais a décidé de fermer la clé du succès. Le but du lavage est d'éliminer les substances de la solution réactionnelle liées à l'antigène ou à l'anticorps en phase solide et les substances interférentes adsorbées de manière non spécifique sur le support en phase solide pendant la réaction. L'adsorption de protéines par des plastiques tels que le polystyrène étant universelle, une adsorption non spécifique doit être évitée autant que possible pendant le test ELISA et cette substance interférant non spécifiquement adsorbée doit être éliminée par lavage lors du lavage. L'ajout de Tween au liquide de lavage peut améliorer l'effet de lavage. Si le lavage n'est pas approfondi, en particulier au dernier moment, s'il existe une adsorption non spécifique du conjugué enzyme, la valeur du blanc sera augmentée. En outre, dans la méthode indirecte, si l’IgG non spécifique de l’échantillon est adsorbée sur la phase solide sans être lavée, elle interférera également avec l’anticorps marqué par une enzyme. La plaque ELISA est généralement lavée selon les méthodes suivantes: 1 absorption de la solution réactionnelle, 2 remplissage de la plaque avec la solution de lavage, 3, mise en place pendant 2 minutes en agitant légèrement, 4 absorption ou versement du liquide dans le trou et application sur le papier absorbant. Le nombre de lavages est généralement de 3 à 4 fois, et parfois même de 5 à 6 fois. Une laveuse automatique ELISA sur plaque peut également être utilisée, mais l'utilisation réelle de l'instrument doit être vérifiée en premier lieu. Chaque pipette de la rondelle doit également être placée près du fond du trou correspondant. Afin de garantir le même effet de lavage de chaque trou. 5. Développement de la couleur et colorimétrie: La température et la durée de la réaction après l'ajout du substrat dans la détermination quantitative doivent toujours être précises conformément à la réglementation. Cependant, la réaction peut généralement être effectuée à température ambiante dans un dosage qualitatif. Si le substrat est en OPD, placez-le à l'abri de la lumière. Le temps de réaction n'a pas besoin d'être strictement contrôlé, et parfois la solution d'arrêt peut être ajoutée à temps en fonction de la coloration du contrôle positif et du contrôle négatif. Pour assurer le même temps de réaction pour chaque puits, la procédure et la vitesse d'ajout de la solution d'arrêt doivent être les mêmes que lors de l'ajout du substrat. La détermination qualitative, telle qu'une réaction négative, est légère et les résultats peuvent parfois être jugés visuellement. Le test ELISA sur plaque utilise généralement un lecteur de marqueur enzymatique pour lire l'absorbance à une longueur d'onde spécifiée. Le lecteur automatique d'étiquettes doit être testé pour la compatibilité avec les puits de la plaque ELISA utilisée et la répétabilité des résultats avant utilisation. Lorsque colorimétrique, vérifiez d’abord le point zéro avec de l’eau distillée, lisez les pores du substrat (les pores sans réaction et n’ajoutez que le substrat) et les puits vierges (les pores mesurés par la solution saline ou du PBS au lieu du spécimen pour l’ensemble du processus) pour enregistrer ce temps. Le statut de réactif du test. Après cela, le trou vide peut être utilisé pour calibrer le point zéro et il est possible de lire l'absorbance du trou d'échantillon, du trou standard et du trou de contrôle. Si le point zéro est toujours corrigé par de l'eau distillée, l'absorbance des trous ci-dessus doit être soustraite de l'absorbance des trous vierges dans le calcul. Ne convient pas à la foule Personnes inappropriées: Généralement, il n'y a pas de personnes qui ne conviennent pas. Effets indésirables et risques Aucune réaction indésirable.

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