apolipoprotéine AⅡ

L'apolipoprotéine est une fraction de lipoprotéines plasmatiques contenant une variété de lipoprotéines et plusieurs différentes apolipoprotéines spécifiques. Jusqu'à présent, plus de 20 types d'apolipoprotéines ont été découverts. Parmi eux, il y a principalement aPOA1, AII, B-100, B48, CI, CII, CIII, D, E et autres. Informations de base Classification de spécialiste: classification de l'examen cardiovasculaire: examen biochimique Sexe applicable: si les hommes et les femmes appliquent le jeûne: le jeûne Conseils: Lors du dernier repas avant le prélèvement de sang, évitez de boire et de manger des aliments riches en graisse, à jeun 12 heures, à extraire le sang veineux de l'avant-bras. Valeur normale 250 ~ 520 mg / L. Signification clinique Réduit les maladies coronariennes, le diabète, le syndrome néphrotique, le déficit héréditaire en ApoA-I (maladie de Tangier), une hypolipoprotéinémie basse familiale, la maladie de Fisheye, la malnutrition sévère, l'hépatite active et la fonction hépatique. Des résultats faibles peuvent être des maladies: maladie coronarienne, considérations liées au diabète (1) immunoturbidimétrie: 1 Concernant l’antisérum: L’analyse turbidimétrique a des exigences plus élevées en antisérum que d’autres méthodes. Le procédé turbidimétrique est de préférence un anticorps polyclonal. L'antisérum doit être exempt d'antisérum. Il faut prêter une grande attention à l'apoA-II extrait du sérum humain pour obtenir une immunopureté, une pureté chromatographique et une pureté d'électrophorèse, ce qui n'est pas possible en laboratoire. Le titre de l'antisérum (titre) ne doit pas être inférieur à 16. Actuellement, dans certains réactifs commerciaux nationaux, l’antisérum apoA-II a un titre extrêmement bas, vous devez donc faire attention lors de l’achat du kit. Si vous n'avez pas d'expérience dans l'identification de la qualité des antisérums avant l'achat, vous devez demander à l'unité qualifiée de l'identifier. 2 L’échantillon standard supérieur (sérum) est dilué 200 fois pour un fonctionnement manuel (100 µl d’échantillon) et s’il existe un échantillonneur de précision, il peut être dilué 20 fois (avec 10 µl). Afin de s'adapter aux conditions de différents laboratoires (tels que différents types d'instruments automatisés), il convient de prendre en compte la proportion d'antigène-anticorps lors de toute modification appropriée. Il convient de noter qu'il ne doit pas y avoir d'excès d'antigène dans le système réactionnel et que la limite supérieure linéaire ne doit pas être inférieure à 2,5 g / L. En d'autres termes, la quantité d'antisérum doit être suffisante, sinon les résultats sont faibles lorsque l'apoA-I est élevé dans l'échantillon. À l’heure actuelle, certains kits médicamenteux nationaux ont non seulement un titre antisérum faible, mais le dosage des échantillons dans l’opération est trop important (comme 3 à 5 µl), l’anticorps est manifestement insuffisant et les résultats mesurés sont inévitablement inexacts. 3 Pour obtenir des mesures précises, les résultats du calcul de la courbe d'étalonnage doivent être effectués avec les mesures de turbidité apoA-II et B (méthode du point final). Une certaine plage (faible dose d’échantillon) de concentration (X) est fondamentalement linéaire avec une turbidité (Y), et la régression linéaire calcule une certaine intersection sur l’axe des Y (valeur A <0,1), de sorte que l’écart du résultat du calcul est calculé par étalonnage en un point. Plus gros, les résultats mesurés ne peuvent pas refléter avec précision le niveau de haut (haut bas, bas haut). Ne négligez pas la précision de la mesure en raison de la simplicité de la méthode du point unique. Quel que soit le type d'instrument automatisé, vous devez d'abord essayer la courbe d'étalonnage. Si le test est répété dans les conditions de l'instrument et dans les conditions spécifiques, l'interception de la droite de régression n'est pas évidente, alors la méthode d'étalonnage en un point peut être utilisée. Lorsque la quantité d'échantillon est comprise entre 3 et 5 µl, même si la quantité d'antisérum est augmentée, la concentration et la turbidité ne sont pas linéaires et ne peuvent être calculées qu'une fois la courbe convertie de manière linéaire. 4 Le principal facteur d'interférence est la turbidité du sérum lui-même (tel qu'un sérum riche en graisses), et les méthodes de prétraitement telles que l'ultracentrifugation ou l'hydrolyse des lipases ne sont pas pratiques. L'effet de la turbidité avec les tensioactifs étant également limité, un tube vierge doit être créé dans le test. En plus de la méthode en deux points utilisée dans l'analyse automatisée, c'est une erreur d'utiliser manuellement un seul réactif sans soustraire le blanc de l'échantillon. Afin de réduire l'effet des effets de matrice sur la réponse à la turbidité, le sérum à valeur fixe doit être utilisé comme étalonneur. De plus, les interférences telles que les particules de poussière et les égratignures dans la plaque doivent être exclues. 5 Certains kits commerciaux (y compris certains produits importés) contenant des valeurs de sérum d'étalonnage inexactes constituent une source d'erreur importante. (2) Méthode d'électrophorèse de fusée: 1 Le taux de dilution de l'antigène et la quantité d'antisérum doivent être choisis de manière à ce que le pic de la fusée soit dégagé, la pente de la courbe d'étalonnage soit modérée et la ligne adaptée. La méthode mesure simultanément apoA-II et apoB, et la quantité des deux antisérums doit être ajustée de manière à ce que leurs hauteurs maximales soient différentes et que la hauteur maximale des apoB ne soit pas inférieure à 1 cm. 2 Différents types d'antisérums (tels que le lapin et le mouton) sont testés au prix équivalent et les résultats seront différents. Le test apoA-I est de préférence un antisérum de lapin. Lorsque le sérum de lapin est utilisé, la forme du pic est nette et le pic produit par le sérum de mouton est épais, la pointe du pic est ronde et émoussée, et parfois une image fantôme apparaît avant le pic. La pente de la courbe d'étalonnage pour le sérum d'étalonnage est également différente. Cependant, quel que soit l'antisérum utilisé, les résultats quantitatifs ne sont pas très différents. 3 Electrophorèse dans certaines conditions, la hauteur de pic du sérum d'étalonnage de différentes dilutions ne changera pas de manière significative, et la pente de la courbe d'étalonnage est fondamentalement la même. Si la hauteur maximale de l'échantillon dépasse la plage de la courbe d'étalonnage, le facteur de dilution de l'échantillon doit être ajusté et testé à nouveau. Le CV inter-conseils est généralement inférieur à 5%. 4 Les résultats de l'électrophorèse des fusées peuvent être observés par coloration ou observation visuelle directe du pic de la fusée. Le premier utilise moins de spécimens et enregistre l'antisérum, mais si les spécimens et l'antisérum sont augmentés de manière appropriée, il est plus pratique de ne pas tacher. L'agarose utilisé doit être standard, électroosmotique ou hypotonique, car l'ajout d'une quantité appropriée de dextrane ou de polyéthylène glycol au gel clarifiera le pic de la fusée. 5 La mesure du pic de la fusée permet de calculer l'aire ou la hauteur du pic. L'aire est la hauteur du pic multipliée par la largeur du pic (la largeur à mi-hauteur du pic). La précision de la mesure va de préférence jusqu'à 0,1 mm. Un équipement d'amplification mécanique ou électronique doit être utilisé. La hauteur du pic dans la plage de la courbe standard est de préférence de 1 à 4 cm. 6 Cette méthode est applicable à l'analyse d'une petite quantité de spécimens. Convient également pour la détermination de apoAII, CI, CII, CIII, D, E et Lp (a). Processus d'inspection Électrophorèse Rocket: 1 plaque de versement: 10g / L d'agarose, 10 ml par plaque, faire fondre dans un bain-marie bouillant, bien mélanger, ajouter 50 μl d'antisérum apoA-II et 50 μl d'antisérum apoB à froid, entre 50 et 55 ° C (la quantité dépend du titre de l'antisérum) ), mélanger rapidement et verser sur la plaque de verre préréglée sur la plate-forme à eau, refroidir et ensuite placé à 4 ° C, après 20 min, percer les trous, le trou se trouve à l'extrémité cathodique de la plaque, le diamètre du trou est de 3 mm, l'écartement des trous est d'au moins 5 mm et la capacité du trou est de 5 μl. Placez la plaque dans le réservoir d'électrophorèse et pontez avec du papier filtre. 2 antigènes dilués: le sérum d'étalonnage a été dilué à 1: 100, 1: 150, 1: 200, 1: 300 et 1: 400 (pour la courbe d'étalonnage) avec une solution à 0,15 mol / L de NaCl, et l'échantillon de sérum a été dilué à 1: 200. Placez le réfrigérateur à 4 ° C pendant 3 jours maximum. 3 Chargement: à l’état de faible courant (10 mA / plaque), diluez le sérum et les échantillons fixés pour absorber 5 µl (précision) et ajoutez-les dans le puits d’échantillon de gel d’agarose. Chaque conseil doit établir une série de normes. 4 puissances: débit constant 24mA / carte, tension terminale 6 ~ 8V / cm, refroidissement à l'eau courante pour maintenir l'agarose à 15 ° C, électrophorèse 3 ~ 4h. 5 protéine déprotéinisée et film sec: la plaque d'agarose après électrophorèse a été immergée dans 0,15 mol / L de NaCl pendant 30 min et le film a été placé sur le film de polyester, et la colle a été absorbée par le papier filtre multicouche sous une pression douce. Humidifiez ensuite le papier filtre, le film et le film polyester ensemble, ou séchez-les à l’aide d’une soufflante à air chaud. Après séchage, le film se séparera naturellement du papier filtre et du film polyester. Coloration 6: Le film d'agarose a été immergé dans la solution de coloration pendant 20 à 30 minutes. 7 Décoloration: Trempez le film coloré avec une solution décolorante jusqu'à ce que le pic de la fusée soit clair et que l’arrière-plan soit à la base incolore. Il peut être bloqué dans deux morceaux de cellophane dans de l'eau et peut être stocké longtemps après séchage. Il peut également être trempé dans l'eau courante pour éliminer le fond. Ne convient pas à la foule Généralement pas de foule. Effets indésirables et risques 1. Infection: faites attention aux opérations aseptiques lors du prélèvement des échantillons de sang et arrêtez les saignements après le prélèvement pour éviter la contamination de l'eau et du liquide et éviter l'infection locale. 2, saignements: après que le sang ait reçu un temps de compression complet, en particulier une coagulopathie, une tendance au saignement, afin d’éviter un suintement sous-cutané local, des ecchymoses et un gonflement.

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