Examen de cromatina de células de líquido amniótico

Para las familias con antecedentes familiares de enfermedades hereditarias recesivas ligadas al cromosoma X, el fenotipo de los padres es normal. Si la madre es portadora del gen causante de la enfermedad, la probabilidad de que el hijo del niño sea del 50%; la hija tiene un fenotipo normal, pero la mitad. Puede ser un transportista. Cuando el padre es un paciente, todos los hijos son normales y las hijas son portadoras de un examen de cromatina de células de líquido amniótico para predecir el sexo del feto y estimar la probabilidad de aparición de ciertas enfermedades hereditarias. Información básica Categoría de especialista: Categoría de verificación de examen materno: Pruebas genéticas (ADN) Género aplicable: si las mujeres están en ayunas: no en ayunas Resultados de análisis: Debajo de lo normal: Valor normal: No Por encima de lo normal: Negativo: Cromatina X:> 0.06 para el feto femenino y 0.05 para el feto masculino. Positivo: La probabilidad de enfermedad recesiva recesiva ligada al cromosoma X se determina en función de los resultados. Consejos: la amniocentesis generalmente se realiza en el segundo trimestre (16-21 semanas de gestación). Valor normal Cromatina X> 0.06 para fetos femeninos, <0.05 para fetos masculinos; La cromatina Y> 0.05 es un feto masculino y <0.04 es un feto femenino. Importancia clínica Para las familias con antecedentes familiares de enfermedades hereditarias recesivas ligadas al cromosoma X, el fenotipo de los padres es normal. Si la madre es portadora del gen causante de la enfermedad, la probabilidad de que el hijo del niño sea del 50%; la hija tiene un fenotipo normal, pero la mitad. Puede ser un transportista. Cuando el padre es paciente, el hijo es normal y la hija es portadora, como hemofilia A, hemofilia B, deficiencia de glucosa-6-fosfato deshidrogenasa, ceguera rojo-verde, distrofia muscular pseudohipertrófica Deficiencia congénita de gammaglobulina. Los resultados positivos pueden ser enfermedades: hemofilia, hiperamonemia congénita en niños, daltonismo La amniocentesis generalmente se realiza en el segundo trimestre (16-21 semanas de gestación). La orina debe drenarse antes de la cirugía, con ambas manos en las caderas y girar suavemente la cintura y el abdomen. Luego en posición supina, use ultrasonido B para detectar el posicionamiento, seleccione el punto de punción y perfore bajo condiciones estrictas de operación aséptica. En general, se toman aproximadamente 20 ml de líquido amniótico y se colocan en un tubo de centrífuga limpio y esterilizado para su inspección inmediata. Proceso de inspección (1) Tomar de 15 a 30 ml de líquido amniótico durante 16 a 20 semanas de embarazo y centrifugar a 1000 r / ml durante 10 minutos. (2) Deseche el exceso de sobrenadante, deje 1 ml de líquido amniótico y células precipitadas, y disperse suavemente en una suspensión celular. (3) Transfiera a un matraz de cultivo cuadrado de 25 ml, agregue 3 ml de un medio que tenga un pH de 6.5 a 6.8 (que contiene penicilina 100 U / ml, estreptomicina 100 μg / ml) y 1 ml de suero de ternera, e incube en una incubadora a 37 ° C. (4) Se observó una gran cantidad de colonias de células epitelioides o fibroblastos después de 7-10 días de cultivo. El medio fresco se puede cambiar en este momento. (5) Cuando las colonias celulares se expanden en pedazos y hay muchas células divisorias circulares translúcidas, se puede agregar colchicina para hacer la concentración final 0.1-0.3 μg / ml, y luego se cultiva en una incubadora a 37 ° C durante 5-6 h. (Todos los procedimientos anteriores se llevan a cabo en condiciones asépticas). Estándares de recolección: 1 con fibroblastos como el tipo principal, el crecimiento de las células; 2 con oculares 10x y observación objetiva 20x, los clones de células en crecimiento cubren 1 o más campos de visión completos; 3 ven más de 10 translúcidos Celdas redondas y más de 10 celdas divisorias brillantes redondas dobles (6) Si las células no están creciendo vigorosamente, el ciclo de crecimiento no es uniforme o las células están envejeciendo, y no se alcanza el estándar de recolección, el subcultivo puede continuar en la botella original. Método: en condiciones estériles, la solución de cultivo se vertió primero, y se añadieron unas gotas de solución de tripsina estéril de 2,5 g / l, y la mezcla se agitó y se vertió. Además, se añadieron 5 a 10 gotas de tripsina, y se agitó suavemente a 37 ° C durante aproximadamente 5 minutos para hacer que las células adherentes se caigan. Se añadieron 4 ml de medio fresco que contenía suero de ternera, y el cultivo se dejó reposar a 37 ° C durante 4 a 5 horas. Cambie cuidadosamente el medio de cultivo y continúe el cultivo, se puede cosechar de 3 a 5 días después del paso. (7) Transfiera la solución de cultivo a un tubo de centrífuga graduado, agregue 1 ml de solución de tripsina ED-TA al matraz, colóquelo en una incubadora a 37 ° C durante 5 minutos y luego enjuague las células adherentes con una pipeta acodada (también se pueden usar 2.5 g /) L digestión en solución de tripsina). Las células separadas de la pared de la botella se vertieron en un tubo de centrífuga, se mezclaron con la fase líquida de cultivo original, y el matraz de cultivo se lavó con una pequeña cantidad de solución salina fisiológica tibia, y las células lavadas también se vertieron en el tubo de centrífuga y se centrifugaron a 1000 r / min durante 10 minutos. (8) Aspire el sobrenadante, añada 3 a 5 ml de solución hipotónica de KCl 0,075 mol / l precalentada a 37 ° C y ajuste a 37 ° C durante 10 a 15 min. (9) La fijación previa, la fijación y la preparación son las mismas que el método de preparación de muestras de cromosomas de células de sangre periférica. No apto para la multitud. Gente tabú: 1. Hubo signos de aborto durante el embarazo. 2. Cuando la temperatura corporal supera los 37.5 ° C. 3. Exfoliación precoz de la placenta, infección abdominal y purulenta. Reacciones adversas y riesgos (1) Lesión materna: punción con aguja punzante herida de los vasos sanguíneos causada por hematoma de la pared abdominal hematoma subseroso uterino. Ocasionalmente, el líquido amniótico ingresa a la circulación sanguínea materna desde el orificio de punción y causa embolia del líquido amniótico. La vejiga no se vació antes de la punción, y la vejiga resultó herida. (2) Lesión del feto, la placenta y el cordón umbilical: la aguja de punción puede dañar al feto y puede causar sangrado, y la placenta y el cordón umbilical también pueden causar sangrado o hematoma. Por lo tanto, la fuente de sangrado debe identificarse cuando se toma líquido amniótico hemorrágico. Si sospecha que proviene de un feto, debe continuar escuchando el corazón fetal. (3) Fuga de líquido amniótico: el líquido amniótico postoperatorio se escapa del orificio, causando muy poco líquido amniótico, afectando el desarrollo fetal e incluso causando un aborto espontáneo o un parto prematuro. (4) aborto o parto prematuro: la incidencia de aborto o parto prematuro es 0.1% -0.2%, a menudo ocurre dentro de una semana después de la cirugía, incluso después de la punción, la ruptura prematura de membranas conduce al parto prematuro. (5) infección intrauterina: puede haber fiebre materna después de la cirugía. La infección intrauterina puede causar un desarrollo fetal anormal o incluso la muerte fetal. Por lo tanto, la amniocentesis debe ser estrictamente aséptica.

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