IgE secretora en esputo

El sitio de SIgE es similar al de SIgA, y también es producido por las células plasmáticas en la lámina propia del tracto respiratorio. Se distribuye en los tejidos mucosos y fluidos exocrinos. Estos sitios son el sitio de invasión de alérgenos y el sitio de reacciones alérgicas. IgE es un monómero, 8S, 19 × 104 ku, y su cadena pesada es más larga que la cadena γ. Una región funcional más (CH4), que puede unirse a las células (como los mastocitos, los basófilos) y desencadenar la liberación de sustancias bioactivas intracelulares en ciertas condiciones, por lo tanto, la IgE es el anticuerpo principal que causa la alergia tipo I. . Información básica Clasificación de especialistas: clasificación del examen respiratorio: examen de esputo Género aplicable: si los hombres y las mujeres aplican el ayuno: ayuno Recordatorio: si los componentes del reactivo principal se preparan o almacenan de manera inadecuada, se degradan e inactivan fácilmente. Valor normal 0.1 a 9 mg / L. Importancia clínica Aumento: IgE es monómero, 8S, 19 × 104ku, y su cadena pesada es más larga que la cadena γ. Una región funcional más (CH4), que puede unirse a las células (como los mastocitos, los basófilos) y desencadenar la liberación de sustancias bioactivas intracelulares en ciertas condiciones, por lo tanto, la IgE es el anticuerpo principal que causa la alergia tipo I. . En pacientes con asma bronquial y neumonitis por hipersensibilidad, se puede aumentar el contenido de SIgE en el esputo. Los resultados altos pueden ser enfermedades: asma bronquial, neumonía alérgica. Los principales componentes reactivos en el ELISA, tales como antígenos, anticuerpos, conjugados enzimáticos, sustratos, etc., se degradan e inactivan fácilmente si no se preparan adecuadamente o se almacenan de manera incorrecta. Hay muchos pasos en el ELISA, y si la operación no está estandarizada, es difícil obtener resultados precisos. Por lo tanto, para garantizar la efectividad de la prueba, se debe realizar un control de calidad para cada prueba. Los controles positivos y negativos proporcionados en los excelentes kits generalmente se pueden usar como control de calidad de la prueba.Según las instrucciones, la efectividad de la prueba se puede juzgar a partir de los valores de absorbancia obtenidos. Tomando como ejemplo la prueba de HBsAg más utilizada en las pruebas clínicas, el control negativo en el kit debe ser suero humano HBsAg negativo, y el control positivo debe indicar el contenido de HBsAg (por ejemplo, 9 ± 2 ng / ml). Se deben realizar tres controles negativos y dos controles positivos simultáneamente para cada lote de pruebas. El valor de absorbancia obtenido por el ensayo de control negativo debe ser menor que cierto valor (por ejemplo, 0.100), y el valor medio de la absorbancia de control positivo menos la absorbancia de control negativo debe ser mayor que cierto valor (por ejemplo, 0.200). Estos valores son valores experimentales específicos para el kit en las condiciones de ensayo especificadas. Por lo tanto, si los resultados de la prueba cumplen con los requisitos, esto indica tanto la efectividad de los reactivos utilizados como la corrección de la operación. Solo en este caso, la prueba por lotes es efectiva. Algunos de los controles positivos y negativos contenidos en el kit no cumplen con los requisitos para el control de calidad, o las condiciones de medición del laboratorio, como el colorímetro, etc., y la diferencia en la descripción del kit, la calidad apropiada se debe utilizar de acuerdo con la situación real. Controles y valores de control de calidad del laboratorio derivados del experimento. El suero de control de calidad del producto es caro. La determinación cualitativa de los productos de control de calidad ELISA generalmente se puede preparar por sí mismos. La prueba de HBsAg todavía se toma como un ejemplo. Se pueden tomar controles negativos de donantes de sangre que son negativos para HBsAg con reactivos de alta calidad. El control positivo se puede preparar agregando una cantidad apropiada de suero HBsAg-positivo al suero de control negativo, y comparando el suero mezclado con un estándar de referencia o un control cuantitativo para determinar el contenido de HBsAg. Luego, se lleva a cabo la dilución apropiada para obtener el suero HBsAg positivo de la concentración deseada, y luego se agrega una cantidad apropiada de conservantes antibacterianos tales como gentamicina y ácido salicílico, y luego se crioconserva a una temperatura baja. Proceso de inspección ELISA es un método de prueba de múltiples reacciones, múltiples reactivos y múltiples pasos, que debe ser operado cuidadosa y cuidadosamente de acuerdo con los requisitos, de lo contrario no se obtendrán resultados precisos. Los procedimientos ELISA utilizados para detectar diferentes elementos son ligeramente diferentes, pero incluyen pasos como cargar, sostener, lavar y colorimetría. Los puntos de operación de cada paso se describen a continuación. 1. Preparación de reactivos: Diluya o prepare los reactivos necesarios para la prueba de acuerdo con las instrucciones del kit. El agua destilada o desionizada utilizada en ELISA, incluido el lavado, debe ser fresca y de alta calidad. El tampón autónomo debe medirse con un medidor de pH. La temperatura del reactivo de prueba sacado del refrigerador debe usarse después de alcanzar la temperatura ambiente. En las pruebas que utilizan HRP como marcador, los contenedores contaminados con metal no están disponibles. 2. Carga: prepare una buena placa ELISA según sea necesario. Las muestras de suero (fluido para desollar) deben recogerse recientemente o almacenarse adecuadamente en el refrigerador. No deben usarse muestras altamente hemolizadas o turbias. Las muestras que contienen azida de sodio como conservante no están disponibles para ELISA de un solo paso para el etiquetado de HRP. Al agregar la muestra, agregue la muestra al fondo del orificio, evite agregarla a la parte superior de la pared del orificio y tenga cuidado de no salpicarla, ya que no aparecerán burbujas de aire. La precisión de la cantidad de muestra añadida en la determinación cuantitativa debe cumplir los requisitos cuantitativos. En la medición cualitativa, la precisión de la cantidad de la muestra a veces no se enfatiza, por ejemplo, se prescribe como una caída. En este punto, debe usar el mismo cuentagotas de diámetro y mantener la posición de carga correcta para que el volumen de cada gota sea básicamente el mismo. La operación y los requisitos para la adición del conjugado enzimático y la adición del sustrato son los mismos que para la adición de la muestra. 3. Aislamiento: generalmente hay dos reacciones antígeno-anticuerpo en el ELISA, es decir, después de la adición de la muestra y después de la adición de la combinación. En este momento, la temperatura y el tiempo de reacción deben ser tan precisos como sea necesario. El recipiente aislado es preferiblemente un baño de agua, y la parte inferior de la placa ELISA debe colocarse en el agua para equilibrar rápidamente la temperatura. Cada placa ELISA no debe apilarse juntas. Para evitar la evaporación, el tablero debe estar cubierto. La placa también se puede colocar plana en una caja húmeda con una gasa húmeda en la parte inferior. La caja húmeda debe precalentarse a la temperatura especificada, por ejemplo, el aislamiento de la incubadora es más importante. 4, lavado: el lavado en el proceso ELISA no es un paso de reacción, pero decidió cerrar la clave del éxito. El propósito del lavado es eliminar las sustancias en la solución de reacción que están unidas al antígeno o anticuerpo en fase sólida y las sustancias interferentes que se adsorben de forma no específica al vehículo en fase sólida durante la reacción. La adsorción de proteínas por plásticos como el poliestireno es universal, por lo que se debe evitar la adsorción no específica tanto como sea posible durante el ensayo ELISA, y esta sustancia interferente adsorbida no específicamente se debe lavar durante el lavado. La adición de Tween al líquido de lavado puede mejorar el efecto de lavado. Si el lavado no es completo, especialmente en la última vez, si hay una adsorción no específica del conjugado enzimático, se elevará el valor en blanco. Además, en el método indirecto, si la IgG no específica en la muestra se adsorbe en la fase sólida sin ser lavada, también interferirá con el anticuerpo marcado con enzima. La placa ELISA generalmente se lava mediante los siguientes métodos: 1 que absorbe la solución de reacción; 2 llena la placa con la solución de lavado; 3, la coloca durante 2 minutos, agita ligeramente; 4 absorbe o vierte el líquido en el orificio y le da palmaditas en el papel absorbente. El número de lavados es generalmente de 3 a 4 veces, y a veces incluso de 5 a 6 veces. También se puede usar una lavadora automática ELISA de placa, pero primero se debe verificar el uso real del instrumento. Cada pipeta de la arandela también debe colocarse cerca del fondo del orificio correspondiente. Para garantizar el mismo efecto de lavado de cada agujero. 5. Desarrollo del color y colorimétrico: la temperatura y el tiempo de la reacción después de agregar el sustrato en la determinación cuantitativa aún deben ser precisos de acuerdo con las regulaciones. Sin embargo, la reacción generalmente se puede llevar a cabo a temperatura ambiente en un ensayo cualitativo. Si el sustrato es OPD, debe colocarse alejado de la luz. No es necesario controlar estrictamente el tiempo de reacción, y a veces la solución de parada se puede agregar a tiempo según la coloración del control positivo y el control negativo. Para garantizar el mismo tiempo de reacción para cada pocillo, el procedimiento y la velocidad de agregar la solución de parada deben ser los mismos que cuando se agrega el sustrato. La determinación cualitativa, como una reacción negativa, es ligera y, a veces, los resultados pueden juzgarse visualmente. Plate ELISA generalmente usa un lector de etiquetas enzimáticas para leer la absorbancia a una longitud de onda especificada. El lector de etiquetas automático debe probarse para determinar la compatibilidad con los pocillos de la placa ELISA utilizada y la repetibilidad de los resultados antes de su uso. Cuando sea colorimétrico, primero verifique el punto cero con agua destilada, lea los poros del sustrato (los poros sin reacción y solo agregue el sustrato) y los pocillos en blanco (los poros medidos por la solución salina o PBS en lugar de la muestra para todo el proceso) para registrar este tiempo. El estado del reactivo de la prueba. Después de eso, el agujero en blanco se puede usar para calibrar el punto cero, y se puede leer la absorbancia del agujero de muestra, el agujero estándar y el agujero de control. Si el punto cero todavía se corrige con agua destilada, la absorbancia de los agujeros anteriores se debe restar de la absorbancia de los agujeros en blanco en el cálculo. No apto para la multitud. Personas inapropiadas: generalmente no hay personas que no sean adecuadas. Reacciones adversas y riesgos No hay reacciones adversas.

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