B-Lymphozyten-Oberflächenmarker

Die humorale Immunfunktionstestung ist eine Art Test, bei dem das Labor die individuelle humorale Immunfunktion bewertet. Der Nachweis der humoralen Immunfunktion basiert auf den grundlegenden Prozessen der humoralen Immunität, einschließlich des Nachweises von B-Lymphozyten, des Ig-Nachweises und des Nachweises von Antikörperproduktionsfunktionen. Grundlegende Informationen Fachklassifikation: Wachstums- und Entwicklungskontrolle Klassifikation: immunologische Untersuchung Anwendbares Geschlecht: ob Männer und Frauen Fasten anwenden: nicht Fasten Tipps: Wenn die Probe am Tag nicht beobachtet werden kann, werden die Zellen in der Konservierungslösung für fluoreszierende Antikörper suspendiert, bei 4 ° C gelagert und am nächsten Tag gezählt. Normalwert Das mittlere IgM betrug 11,2 ± 6,0%, das mittlere IgG 7,5 ± 3,3%. Klinische Bedeutung Die Abnahme der Anzahl von B-Zellen hängt mit dem humoralen Immunmangel zusammen, und die Zunahme der Anzahl von B-Zellen hängt mit der malignen Proliferation von B-Zellen zusammen. Vorsichtsmaßnahmen (1) Das Vorhandensein von agglomeriertem IgG in dem fluoreszierenden Antikörperreagens und das agglomerierte IgG können falsch positiv an den Fc-Rezeptor auf der Oberfläche der B-Zelle gebunden sein. 1 Fluoreszierende Antikörper mit einem übermäßigen F / P-Molverhältnis können nicht verwendet werden, und im Allgemeinen sind 1 bis 3 bevorzugt. 2 Fluoreszierende Antikörper, die niedrig konzentrierte Proteine ​​enthalten, sind bei niedriger Temperatur instabil und sollten nicht unter 2 mg / ml liegen. 3 Bei niedriger Temperatur gelagerte fluoreszierende Antikörper sollten nicht wiederholt eingefroren und 30 Minuten bei 150.000 U / min zentrifugiert werden, bevor sie zur Entfernung von Aggregaten verwendet werden. (2) Wenn lebende Lymphozyten zur Immunfluoreszenzfärbung verwendet werden, wird allen Reagenzien (markierter Antikörper, Hank-Lösung usw.) NaN3 zugesetzt, um die Fluidität der Zellmembran zu begrenzen. Andernfalls kommt es zu kappenartiger Fluoreszenz und Phagozytose, und die tatsächliche Anzahl fluoreszierender Zellen nimmt ab. (3) Bei Anfärbung mit einem Anti-IgG-Fluoreszenz-Antikörper bindet der in der Probe enthaltene Antigen-Antikörper-Immunkomplex (IgG-Typ) an den Fc-Rezeptor auf der Oberfläche der B-Zelle und ist fluoreszenzpositiv. Aus diesem Grund wurde vorgeschlagen, mit fluoreszenzmarkiertem Anti-F (ab) 2-Antikörper zu färben, um Fc-Rezeptoren von der Färbung auszuschließen. In den letzten Jahren wurden aufgrund des Auftretens monoklonaler Antikörper gegen B-Zell-spezifische Moleküle (CD19, CD20 usw.) tendenziell fluoreszenzmarkierte monoklonale Antikörper gegen CD19 oder CD20 verwendet, um direkt mit peripheren Blutlymphozyten zu reagieren. Die monoklonalen Antikörper (Primärantikörper) von CD19 und CD20 werden zuerst mit Lymphozyten umgesetzt, dann mit fluoresceinmarkiertem Kaninchen- oder Ziegen-Anti-Maus-IgG (zweiter Antikörper) kombiniert, gezählt durch Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie, um peripheres Blut zu zählen. B-Lymphozyten. Inspektionsprozess (1) Nehmen Sie 2 ml Heparin-Antikoagulans, geben Sie die gleiche Menge Hank-Flüssigkeit hinzu und mischen Sie alles gut. Wiederholen Sie die Schicht auf der geschichteten Lösung (2000 U / min) und zentrifugieren Sie sie 20 Minuten lang. Die Lymphozytenschicht wurde herausgenommen, die Hank-Lösung wurde zugegeben, dreimal mit 1200 U / min gewaschen, 10 min zentrifugiert, die Lymphozytenkonzentration auf 1 × 10 7 / ml eingestellt und 0,1 ml in zwei Röhrchen verteilt. (2) Wasche die Lymphozytensuspension noch einmal mit Hanks Lösung, verwerfe den Überstand und benutze das Filterpapier, um die verbleibende Flüssigkeit von der Innenwand des Röhrchens zu entfernen, und füge 2 Tropfen Kaninchen-Anti-Human-IgG und Anti-Human-IgM-Fluoreszenz-Antikörper (etwa 0,08 ml) hinzu. Stellen Sie den Inkubator nach leichtem Schütteln für 30 Minuten auf 37 ° C. (3) Aus dem Inkubator nehmen und zweimal mit Hank-Lösung waschen, 10 Minuten bei 1000 U / min zentrifugieren, den gesamten Überstand vorsichtig absorbieren, 1 Tropfen 50 ml PBS-gepuffertes Glycerin auf den Boden des Röhrchens geben, mischen und 1 Tropfen zugeben Decken Sie das Deckglas auf dem Objektträger ab und beobachten Sie es unter einem Fluoreszenzmikroskop. Nicht für die Menge geeignet Es gibt keine Tabus. Nebenwirkungen und Risiken Keine Komplikationen oder Gefahren.

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