B-lymfocyt overflademarkører

Humoral immunfunktionstest er en type test, hvor laboratoriet vurderer individuel humoral immunfunktion. Påvisningen af ​​humoral immunfunktion er baseret på de grundlæggende processer med humoral immunitet, herunder B-lymfocyt-påvisning, Ig-detektion og påvisning af antistofproduktionsfunktioner. Grundlæggende information Specialistklassificering: klassificering af vækst og udviklingskontrol: immunologisk undersøgelse Gældende køn: om mænd og kvinder anvender faste: ikke faste Tip: Hvis prøven ikke kan observeres dagen, suspenderes cellerne i den fluorescerende antistof-konserveringsopløsning, opbevares ved 4 ° C og tælles den næste dag. Normal værdi Det gennemsnitlige IgM var 11,2 ± 6,0%; det gennemsnitlige IgG var 7,5 ± 3,3%. Klinisk betydning Faldet i antallet af B-celler er relateret til den humorale immunmangel, og stigningen i antallet af B-celler er relateret til den ondartede proliferation af B-celler. Forholdsregler (1) Tilstedeværelsen af ​​agglomereret IgG i det fluorescerende antistofreagens og det agglomererede IgG kan være falsk-positivt bundet til Fc-receptoren på overfladen af ​​B-cellen. Derfor er det for at undgå agglomerering af IgG nødvendigt at være opmærksom på: 1 Fluorescerende antistoffer med et for stort F / P-molforhold kan ikke anvendes, og generelt foretrækkes 1 til 3. 2 Fluorescerende antistoffer, der indeholder proteiner med lav koncentration, er ustabile ved lav temperatur og bør ikke være lavere end 2 mg / ml. 3 Fluorescerende antistoffer, der er opbevaret ved lav temperatur, bør ikke fryses-optøes gentagne gange og centrifugeres i 30 minutter ved 150.000 r / min før brug for at fjerne aggregater. (2) Når der anvendes levende lymfocytter til immunofluorescensfarvning, tilsættes NaN3 til alle reagenser (mærket antistof, Hank-opløsning osv.) For at begrænse fluidmængden af ​​cellemembranen. Ellers forekommer cap-lignende fluorescens og fagocytose, og det faktiske antal fluorescerende celler vil falde. (3) Når der er farvet med et anti-IgG-fluorescerende antistof, binder antigen-antistoffet (IgG-typen) immunkompleks indeholdt i prøven sig til Fc-receptoren på overfladen af ​​B-cellen og er fluorescerende positiv. Af denne grund er det blevet foreslået at farve med fluorescerende mærket anti-F (ab) 2-antistof for at udelukke, at Fc-receptorer bliver farvet. På grund af fremkomsten af ​​monoklonale antistoffer mod B-celleoverfladespecifikke molekyler (CD19, CD20 osv.) Er det blevet tilbøjelig til at anvende fluoresceinmærkede monoklonale antistoffer mod CD19 eller CD20 til direkte reaktion med perifere blodlymfocytter; De monoklonale antistoffer (primære antistoffer) af CD19 og CD20 omsættes først med lymfocytter, derefter kombineret med fluoresceinmærket kanin eller gede-anti-mus-IgG (andet antistof), talt med fluorescensmikroskopi eller flowcytometri til at tælle perifert blod. B-lymfocytter. Inspektionsproces (1) Tag heparin-antikoagulant 2 ml, tilsæt en lige stor mængde Hank-væske og bland godt. Gentag laget på den lagdelte opløsning, 2000r / min, centrifuge i 20 minutter. Lymfocytlaget blev taget ud, Hank-opløsningen blev tilsat, vasket 3 gange, 1200 r / min., Centrifugeret i 10 minutter, lymfocytkoncentrationen blev indstillet til 1 x 107 / ml, og 0,1 ml blev dispenseret i to rør. (2) Vask lymfocyt-suspensionen igen med Hanks opløsning, smid supernatanten og brug filterpapiret til at fjerne den resterende væske fra rørets indre væg, og tilsæt 2 dråber kanin-anti-humant IgG og anti-humant IgM fluorescerende antistof (ca. 0,08 ml). Efter omrystning forsigtigt anbringes 37 ° C inkubator i 30 minutter. (3) Tag ud af inkubatoren og vask to gange med Hank-opløsning, centrifuger ved 1000 r / min i 10 minutter, absorber forsigtigt al supernatanten, tilsæt 1 dråbe 50 ml PBS-bufret glycerin til bunden af ​​røret, bland og tag 1 dråbe for at tilføje På dækslet skal du dække dækslet og observere under et fluorescensmikroskop. Ikke egnet til mængden Der er ingen tabuer. Bivirkninger og risici Ingen komplikationer eller farer.

Materialet på dette sted er beregnet til generel informativ brug og er ikke beregnet til at udgøre medicinsk rådgivning, sandsynlig diagnose eller anbefalede behandlinger.